医学遗传学实验：免疫荧光技术原理及步骤.pptxVIP

免疫荧光技术原理及步骤 基 本 原 理 荧光显微镜 操 作 步 骤基本原理1941年，Coons首次建立免疫荧光技术，检测组织内抗原。Albert H. Coons(1912 –1978)基本原理免疫荧光 (Immunofluorescence, IF)技术，是根据抗原－抗体反应的原理，用已标记了荧光素的荧光抗体（抗原）作为探针检查组织或细胞内相应的抗原（抗体），在组织或细胞中所形成的抗原－抗体复合物上沉着有荧光素，在荧光显微镜下观察样品，荧光素受激发光的照射而发出荧光，通过荧光所在的细胞或组织， 实现对抗原或抗体的定位，同时还可利用定量技术对样本进行定量。 基本原理 该技术将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合；以荧光素作为标记物，与已知抗原或抗体结合，但不影响其免疫学特性；借助荧光显微镜，直接观察呈现特异性荧光的抗原-抗体复合物及其分布。紫外光激发荧光物质放射荧光示意图技术特点 特异性强 敏感性高 速度快 适应性广主要缺点是：非特异染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也比较复杂。根据实验方法分类 （1）直接法 （2）间接法 （3）补体法 （4）其他法直接法将荧光标记的特异性抗体（抗原），直接加在抗原（抗体）上，经一定温度和时间的染色，水洗-干燥-封面-镜检；操作简便、特异性高、非特异染色少；常用于肾穿刺、皮肤活检和病原体检查；其缺点是每检查一种抗