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NY-ESO-1抗原T细胞受体基因慢病毒载体的构建及病毒的产生与鉴定的中期报告
在NY-ESO-1抗原T细胞治疗的研究中,慢病毒载体是一种常用的基因传递系统。本研究旨在构建NY-ESO-1抗原T细胞受体的慢病毒载体,产生高质量的病毒,并对病毒进行鉴定。
首先,我们利用PCR技术扩增了包含NY-ESO-1 T细胞受体α和β基因、T细胞共刺激因子CD28和CD3ζ基因的人工合成DNA序列。经过限制酶切后,将这些基因插入到慢病毒载体pRRL-CMV中。然后,将重组载体pRRL-NY-ESO-1-TCR-CD28-CD3ζ转染到293FT细胞中,并通过聚乙二醇法进行包装和放大,最终获得了高效的病毒。
接下来,我们使用流式细胞术对病毒进行鉴定。结果表明,pRRL-NY-ESO-1-TCR-CD28-CD3ζ病毒的感染效率达到了70%,并能够特异性地识别和激活NY-ESO-1抗原CD8+T细胞。此外,我们还通过PCR、限制酶切和DNA测序分析了慢病毒载体中NY-ESO-1 T细胞受体基因的插入和序列,并确认其准确性和稳定性。
综上所述,我们成功构建了NY-ESO-1抗原T细胞受体基因的慢病毒载体,并生成了高效、特异性和稳定的病毒,为后续的实验提供了重要的工具。
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