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ECL 化学发光底物 （超敏） 产品编号 产品名称 规格 BL523A ECL 化学发光底物 （超敏） 100ml BL523B ECL 化学发光底物 （超敏） 500ml 产品简介： ECL 化学发光底物 （超敏）用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP 的抗体及其 关联的抗原。该ECL 底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用 性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。 产品组份： 产品编号 产品名称 规格 BL523A-1/ BL523B-1 增强型发光液 A 液 50ml/250ml BL523A-2/ BL523B-2 稳定剂 B 液 50ml/250ml 用途： 用于HRP 标记抗体的Western Blot 和HRP 标记探针的核酸杂交。 产品特点： 1、灵敏度高：可检测低皮克级的蛋白； 2、信号持续时间长：光信号持续时间长达 5 小时； 3、稳定试剂：工作液在 24 小时内保持稳定； 4、成像方法：适用于X 射线胶片、CCD 或激光凝胶成像仪； 5、价格经济：针对稀释的抗体浓度条件进行了优化，节省抗体： 一抗：以1mg/mL 储存液稀释 1:1,000 至 1:4,000 倍 二抗：以1mg/mL 储存液稀释 1:2,000 至 1:5,000 倍 6、简单易用：可替代其它公司的ECL 发光底物，操作步骤无需进行特别优化； 使用方法: 1、执行常规 SDS、转膜和Western Blot 步骤。注意用HRP 标记 IgG 或用一抗-链 亲和素-生物素-HRP 夹法。 2、Western Blot 最后一次洗膜的同时配制发光工作液：分别取等体积的A 液和B 液，放 入干净容器中混合 （注意吸取A 液和B 液的吸头一定要分开，避免试剂污染）。建议立即使 用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3、Western Blot 最后一次洗膜后，用镊子将膜取出，用滤纸吸去多余的洗涤液 （切勿接 触膜的蛋白面），然后置于一洁净保鲜膜上或塑料容器内。 4、根据膜的大小，按比例滴加配置好的ECL 工作液到膜上，确保工作液均匀覆盖在膜 上，放置 1-3 分钟。 5、取膜，用滤纸吸去多余的液体，将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行压片检测或化学 发光成像仪检测。 6 、压片检测：将膜固定于X 光胶片暗盒内 （注意蛋白面向上）。暗房内压X 光胶片， 分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 7 、化学发光成像仪检测：将膜放置到化学发光成像仪内，参考仪器说明书进行检测。 注：建议第一次曝光 60 秒，之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底 物孵育后的前 5-30 min 期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降， 如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。 注意事项： 为获得最佳效果，需优化该系统，包括样品量、一抗和二抗浓度、膜和封闭试剂的类型。 1、没有一种封闭试剂对所有系统而言都是最佳的，所以为每一个免疫印迹检测系统找到 最合适的封闭缓冲液非常必需。 2、使用亲和素/生物素检测系统时，避免使用牛奶作为封闭试剂，牛奶中含有的不定量内 源性生物素会导致高背景信号。 3、实验中避免印迹膜变干。 4、叠氮钠是 HRP 的抑制物，不要使用叠氮钠作为缓冲液的防腐剂。 5、避免手与膜直接接触，实验过程应戴手套或使用干净的镊子。 6、短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液，但应避免长期暴露在强光下。 保存条件： 室温运输，4℃密封避光保存一年，短期可放置室温。 问题解答： 问题 可能问题 解决方案 胶片上有反转像 膜上有褐色