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5种促生促生促生抗寒剂在水稻上的应用 水稻是我国的主要粮食，属于喜热作物。在我国南方，尤其是我国早春冷潮的频繁入侵，不仅频繁访问，而且还持续很长时间，导致了苗木的腐败和幼苗的稀释。为了研究更好的抗寒性药物，提高水稻幼苗的抗寒性，促进水稻幼苗在早春寒潮中缓慢生长，并应用于生产。1998年至1999年，作者将五种抗寒性药物，如cacl2、聚乙烯、秋葵、蔬菜素和磷酸缓冲液进行了比较，并对水稻苗的抗寒性进行了抗寒性试验。通过测定美洲植物组织中的游离可溶性糖、电导率、叶柄和干重，作为评价耐寒剂的生理指标。 1 材料和方法 1.1 油脂缓冲液配制 作物品种:湘早籼25号,湘潭市种子公司提供. 抗寒剂:CaCl2(0.3 mol/L);聚乙二醇(PEG25%);爱多收(6 000 x);油菜素内脂(BR10-4?mg/L);磷酸缓冲液(2/45 mol/L?KH2PO4+1/45 mol/L?NaH2PO4·12H2O). 仪器:HANCPINCFA1004电子天平;DDS-12A型数字电导率仪;722光栅分光光度计;电热恒温培养箱;101A-1型干燥箱;电热恒温水浴锅;LRH-250-GS人工气候箱. 试剂:蒽酮、葡萄糖、浓硫酸、丙酮. 1.2 测试方法 1.2.1 不同处理对水稻秧苗的催芽作用 将催芽的湘早籼25号种子分别播在盛有泥土的18个培养皿中(15×2.5 cm),每个培养皿播发芽一致的种谷100颗,然后进行泥浆踏谷,移入人工气候箱,在(28±1)℃下进行培养.抗寒剂浸种加喷施是将湘早籼25号种谷用水洗净沥干,分别将CaCl2(30 mol/L),聚乙二醇(PEG25%),爱多收(6 000 x),油菜素内脂(BR10-4mg/L)磷酸缓冲液(2/45 mol/L?KH2PO4+1/45 mol/L?NaH2PO412H2O)和自来水浸种(浸三天三夜),然后用自来水冲洗干净,在28±1 ℃进行催芽.播种、育秧方法同上.待三叶一心,分别以CaCl2(30 mol/L),聚乙二醇(PEG25%),爱多收(6 000 x),油菜素内脂(BR10-4mg/L)和磷酸缓冲液(2/45 mol/L?KH2PO4+1/45 mol/L?NaH2PO4·12H2O)与CK6个处理,4种方法,2次重复,各喷施6盘,喷施至叶片滴水为止,在人工气候箱(28±1)℃培养1 d后,移入(4±1)℃人工气候箱培养4 d,8 d,在(26±1)℃恢复1 d,待检则4 d,8 d各种抗寒剂处理与CK水稻秧苗的电导率、干重、可溶性糖和叶绿素总量的含量. 1.2.2 dds-12a-12a型电导法 选择长势较好,大小一致的秧苗各20株,用镊子小心去掉幼苗上的残留胚乳,切勿伤害根系,用蒸馏水漂洗数次,以除去伤口上的物质,沥干,用吸湿纸吸干根部表面的水分,分别放入盛有20 ml蒸馏水的小烧杯中,使根部全部浸入水中,使CK与各处理样品同时平衡3 h后,取出样品,用DDS-12A型数字电导仪分别测定其各样品液的电导率和蒸馏水的电导率,再计算样品液的电导率. 1.2.3 干重测量 将上述各20株秧苗分别在85 ℃101A-1型干燥箱烘烤3 h后,于HANCPINCFA1004电子天平上称其重量. 1.2.4 可溶性糖含量的测定 称取烘干叶片各0.1 g,剪碎分别装入提取管中,加80%乙醇15 ml,于电热恒温水浴锅沸水浴提出5 min,冷却后,向提取管中加蒸馏水10 ml,摇动2 min,过滤到20 ml刻度定容试管中,再向提取管中加5 ml蒸馏水,摇动2 min,过滤到定容管中,用蒸馏水定容至20 ml,轻轻摇动,静置10 min,即为提取液.吸取0.25 ml提取液注入10 ml试管中,再加入0.75 ml蒸馏水,5 ml蒽酮试剂,摇匀于沸水中水浴10 min显色,严格控制时间,以1 ml蒸馏水加5 ml蒽酮试剂同样于沸水中水浴10 min作参比.冷却后,于722栅光分光光度620 nm处测定A值,按回归曲线计算y=151.5x+0.63,求出提取液的浓度(其中y为提取液浓度,x为吸光值,单位10-6).然后计算样品中可溶性糖的含量即: 可溶性糖含量(%)=4y×20×10?60.14y×20×10-60.1×100%=8y×10-2% 1.2.5 叶绿素含量的测定 取相同部位新鲜叶片各0.5 g于研钵中,加少量石英砂和CaCO3粉末,加蒸馏水5 ml,研磨成匀浆,然后用10 ml容量瓶定容至10 ml,吸取2.5 ml于试管中,加纯丙酮10 ml,摇匀静置20 min,取上清液于722栅光分光光度计663 nm与645 nm处测定A值(以80%丙酮作参比),根据Lamber-Beer定律和著名的Arnonin计算公式CT(mg/L)=Ca+Cb=8.02A663+2