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5-fu胃癌多药耐药细胞株的建立及凋亡相关蛋白的表达 对幽门肿瘤的药物类抗剂的抗剂已成为失败的重要原因之一。结果表明，肿瘤细胞对化疗药物的耐受性与多种因素有关，死亡抑制在肿瘤细胞药物的形成中起着重要作用。为了研究胃癌耐药机制,本研究以临床最常用的胃癌化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)诱导低分化胃腺癌细胞株BGC823建立起胃癌多药耐药细胞株BGC823/5-FU,并以此为模型,检测凋亡相关蛋白生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达变化,探讨胃癌细胞对5-FU耐药的机制。 材料和方法 1 试剂和仪器 RPMI-1640培养液购自Gibco;新生小牛血清购自杭州四季青公司。四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma。Survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3抗体购自Santa Cruz。5-FU购自天津金辉氨基酸有限公司;阿霉素(ADM)购自浙江海正药业股份有限公司;丝裂霉素C(MMC)购自Kyowa Hakko Kogyo;顺铂(DDP) 购自山东齐鲁制药厂;其它试剂均为国产分析纯。 流式细胞仪(FACScan,BD),酶标仪(Model 850,Bio-Rad)。 2 方法和步骤 2.1 耐药细胞培养 人胃低分化腺癌细胞株BGC