分子生物学实验技术基因操作工具酶详解演示文稿.pptVIP

活性： 5`→3`聚合活性，3`→5` 外切酶活性，无5`→3` 外切酶活性。 用途： （1）填补或标记DNA的3`隐蔽末端； （2）催化合成cDNA第二链； （3）DNA序列测定 3.2 Klenow聚合酶 本文档共47页；当前第30页；编辑于星期三\1点58分 EcoR I 酶切末端 同位素标记的EcoR I 酶切末端 α- 32P-dATP Back 本文档共47页；当前第31页；编辑于星期三\1点58分 显著特点：热稳定性。70℃反应2h残留活性90 %； 93℃ 反应 2 h残留活性60% ；94℃ 反应 2 h残留活性40%。 应用：（1）对DNA的特定片段进行体外扩增； （2） DNA序列测定。 3.3 Taq DNA聚合酶 Back 本文档共47页；当前第32页；编辑于星期三\1点58分 逆转录酶 (reverse transcriptase)： 又称RNA指导下的DNA聚合酶。 活性： 5`→3`聚合酶活性和RNaseH活性。聚合作用所需模板可以是RNA或DNA，引物是带3`-OH的RNA或DNA。 3.4 逆转录酶 本文档共47页；当前第33页；编辑于星期三\1点58分 分子生物学实验技术基因操作工具酶详解演示文稿 本文档共47页；当前第1页；编辑于星期三\1点58分 优选分子生物学实验技术基因操作工具酶 本文档共47页；当前第2页；编辑于星期三\1点58分 酶 酶 限制性核酸内切酶 逆转录酶 DNA连接酶 末端转移酶 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ S1核酸酶 Klenow酶 DNA酶Ⅰ Taq DNA 聚合酶 RNA酶A 多核苷酸激酶 碱性磷酸酶 基因工程操作中最常用的工具酶 本文档共47页；当前第3页；编辑于星期三\1点58分 主要内容 1 限制性核酸内切酶 2 DNA连接酶 3 DNA聚合酶 4 修 饰 酶 5 小 结 本文档共47页；当前第4页；编辑于星期三\1点58分 酶 主要用途 限制性核酸内切酶 识别DNA特定序列，切割DNA分子 DNA连接酶 连接两个DNA分子或片段 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 或Klenow酶 1 制作DNA探针；2 合成cDNA第二链； 3 填补双链DNA 3`凹端；4 DNA测序。 Taq DNA 聚合酶 聚合酶链式反应（PCR） 多核苷酸激酶 多核苷酸5`-OH磷酸化，制末端标记探针 末端转移酶 使3`-末端加同聚物尾 S1核酸酶 降解单链DNA或RNA DNA酶Ⅰ 在双链DNA上产生随机切口 RNA酶A 降解RNA 逆转录酶 补平反应，合成cDNA或制探针 碱性磷酸酶 切除核酸末端磷酸基 SUMMARY Home 本文档共47页；当前第5页；编辑于星期三\1点58分 1 限制性核酸内切酶 1.1 引 言 1.2 命 名 1.3 分 类 1.4 活性及影响因素 Home 本文档共47页；当前第6页；编辑于星期三\1点58分 核酸酶（Nuclease）： 通过切割相邻两个核苷酸残基间磷酸二酯键，导致核酸分子多核苷酸链水解断裂的蛋白酶。 （1）按作用对象分: DNAase RNAase （2）按断裂核酸分子不同方式分： Endonuclease Exonuclease 1.1 引言—两个概念 本文档共47页；当前第7页；编辑于星期三\1点58分 限制性内切核酸酶（restriction endonuclease): 指一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在识别序列内或附近特异切割双链DNA的核酸内切酶。 限制酶与甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰系统（Restriction-Modification System)。 Back 本文档共47页；当前第8页；编辑于星期三\1点58分 1.2 命 名 命名原则： 第一个字母（大写, 斜体）： 该酶来源的微生物属名； 第二、三个字母（小写、斜体）：微生物种名； 若该微生物有不同的变种和品系，再加上该变种和品系的第一个字母（大写） 若从同一微生物发现多种限制性内切酶，则依照发现和分离的先后顺序用罗马字母表示。 例如：EcoRⅠ 从大肠杆菌R株分离的第一种限制酶命名为EcoRⅠ， 其中E 代表属名（Escherichia)，co 代表种名（coli)，R 代表株系（RY13），Ⅰ 代表该菌株中首次分离到。 Back 本文档共47页；当前第9页；编辑于星期三\1点58分 1.3 分 类 1.3.1 Ⅰ 型限制性内切酶 Ⅱ 型限制性内切酶 1.3.3 Ⅲ 型限制性内切酶 Back 本文档共47页；当前第10页；编辑于星