滚环扩增技术检测结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB单碱基突变的应用研究的中期报告.docxVIP

滚环扩增技术检测结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB单碱基突变的应用研究的中期报告 该研究旨在开发一种快速、简便、灵敏的方法检测结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB单碱基突变。目前已经完成了实验室内部的初步验证和优化工作，并且将进一步进行临床样本的检测。 该方法基于滚环扩增技术（RCA），利用与rpoB基因中相关序列特异结合的引物和聚合酶，在体外扩增出含有突变位点的DNA片段。此过程采用了特殊的双链位点接触探针，可以实现高效、特异性的扩增。同时，该方法还结合了高通量测序技术，可以快速、准确地鉴定样品中突变的碱基。 在实验室内部的初步验证和优化中，我们成功制备了用于滚环扩增的引物和探针，并进行了全系列大小为5-220bp的突变模拟序列的验证和确定。结果表明，该方法具有高效、特异、灵敏的特点，能够检测出恒温扩增和PCR扩增不能检测到的低浓度样品。 目前，我们正在进行临床样本的检测。通过对诊断为结核病的患者样本的检测，我们将进一步验证该方法的可行性和准确性，并与现有方法进行对比。预计该研究的结果可以为结核病的早期诊断及治疗方案提供重要参考。