免疫浊度测定及其临床应用课件.pptxVIP

免疫浊度测定 及其临床应用 免 疫 测 定 IMMUNOASSAY I A 免疫测定原理 利用抗原抗体反应检测标本中微量物质 抗原抗体复合物 Ag * Ab 抗原+抗体 Ag +Ab 免疫浊度测定 标记免疫测定 g ~ ng ng ~ pg 免疫测定分类 免疫浊度测定 海德堡曲线 Heidelberg’s Curve 免疫沉淀反应 免疫浊度测定分类 透射浊度法 散射浊度法 透射浊度法和散射浊度法的光路 样品 I0 检测器A 检测器B (散射浊度法) (透射浊度法) 浑浊 光源 9 散射浊度法 Time 1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition Fluid in the cell has causes little scatter Scatter Signal Versus Time Scatter Nephelometry 3 1 免疫浊度测定分类2 终 点 法 速 率 法 终 点 法 固定时间法 速率峰的测定 速率峰的测定 Rate Nephelometry 3 2 1 Time 1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition First derivative: rate of change of scatter over time; this is the SLOPE of the curve Measure the RATE After Antibody Addition Scatter Rate 在速率峰基础上完成的标准曲线 CONCENTRATION RATE 抗原过剩的测定 Analyte-antibody complexing Antigen Excess Antibody Analyte 抗体过量时的反应 抗原过量时的反应 ARRAY抗原过量自动检测 RATE of SCATTER 85 反应时间(秒) 加入校正液 60 0 免疫浊度抑制测定 (小分子物质) 药物浓度测定 1 特异性 2 亲和力 3 反应时保持抗体过剩 4 测定范围应包括高于及低于 5 正常值的50% 5 测定的精密度应在5%左右 抗体试剂的要求 校正曲线：聚乙二醇的增强作用 C1 C2 C3 抗原浓度 4%聚乙二醇 吸光度 试剂组成配方举例 试剂1 100mmol Tris或磷酸缓冲液 pH7.2 ~ 8.2 4% 聚乙二醇(分子量6000或10000) 1%非离子型表面活性剂 150mmol氯化钠或硫酸钠 0.1 g/l 叠氮钠 试剂2 100mmol Tris或磷酸缓冲液 pH7.2 ~ 8.2 20% 多克隆羊抗血清 150mmol氯化钠 0.1 g/l 叠氮钠 抗体 过剩 抗原 过剩 抗原浓度 Ag * Ab 测定范围 技术特性 并行的检测系统: •Rate NIPIA •Rate Nephelometry NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析 Benefits Ability to expand the menu into high sensitivity assays including: Ferritin, Digoxin, and IgE. NIR eliminates the interference ofbiological substances such as biliribin and hemoglobin. NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析 优点 扩展检测菜单，增加高敏项目分析： 如铁蛋白，地高辛 ，IgE，超敏CRP等 近红外波长分析消除生物物质如胆 红素和血色素的干扰 NIR：940nm波长 近0oC检测角 检测颗粒大小： 200~500nm直径 速率法测定 速率散射法：670nm 激光光源 940nm LED光源 NIPIA： 蛋白应用分类 心血管功能监测 载脂蛋白A1 载脂蛋白B 脂蛋白a