水处理工艺单元进水出水监测—粪大肠菌群的测定.pptx

总大肠菌群的测定;;主要内容;1.1 为什么要检测水体的总大肠菌群;1.2 大肠菌群的环境卫生学意义;大肠菌群是一群好氧或兼性厌氧，在37℃培养24～48h、能发酵乳糖产酸并产气、革兰氏阴性、无芽孢杆菌； 大肠菌群广泛分布各类水体、易培养、易观察。;主要内容;根据大肠菌群特性：能发酵乳糖产酸、产气，G-，无芽孢杆菌;水样中大肠菌群数量如何确定？ 多管发酵法用最可能数（Most?Probable?Number，简称MPN?）来表示试验结果的。利用泊松分布原理，根据发酵阳性管的数量，估计出水样中大肠菌群的最可能数（MPN），再经过证实和确认检测，预测出水样中的总大肠菌群数。;实验材料及仪器 1）乳糖蛋白胨培养液（加溴甲酚紫指示液）；紫色—黄色 2）三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液； 3）伊红美蓝培养基（EMB培养基）—深紫色有金属光泽菌落； 4）革兰氏染色剂； 5）显微镜，烧瓶、大试管、发酵小套管、培养皿、移液管、无菌水等。;1）自来水水样：先将水龙头用火焰烧灼3min灭菌，放掉管中积水5min，再用无菌容器接水样后，立刻送检。 2）地表水水样：将无菌的具塞玻璃瓶瓶口向下，浸入距水面10～15cm深处，翻转瓶子，拔掉玻璃塞，水样流入瓶中后，将瓶塞塞好，再从水中取出后，立刻送检。;主要内容;1. 初发酵阶段 1） 取水样300ml分别加入12个发酵瓶：2个含有50ml三倍乳糖发酵烧瓶各加100 ml水样；10个含有5 ml三倍乳糖发酵管各加10 ml水样，混匀。2） 在37℃培养24h至48 h，查看发酵结果。;2. 证实：产酸产气的细菌是G- 将产酸产气的混合液平板划线，接种至伊红美蓝培养皿，培养24h后，选取深紫色有金属光泽的菌落进行革兰氏染色。;3. 确认 将平板划线分离、染色呈阴性的菌落接种到乳糖发酵管，进行复发酵试验，确认发酵管中有大肠菌群存在。;三倍浓缩乳糖5ml/管;10ml水量的阳性管数;向装有5mL乳糖培养液的5个发酵管分别加入10mL水样；向装有10mL乳糖培养液的5个发酵管分别加入1mL水样；向装有10mL乳糖培养液的5个发酵管分别加0.1mL水样，混匀。（共计15管总水样55.5mL）;池水、河水、湖水等地表水的水样;根据发酵阳性管数，查“总大肠菌群MPN检索表”，可确定每100mL水样中存在的总大肠菌群数。 我国监测标准是以1L为报告单位，故MPN值再乘以10，就是每升水中的总大肠菌群数。 ;总大肠菌群MPN检索表;滤膜是一种微孔性薄膜（孔径0.45μm），将水样注入已灭菌的放有滤膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，然后将滤膜贴在M-FC培养基上，37℃培养，计数滤膜上生长的细菌数，计算出1L水样中含有总大肠菌群数。;放在琼脂培养基上培养;M-FC 培养基的制备、消毒。 水样量选择：根据细菌受检验的特征和水体污染程度。理想的水样体积是一片滤膜上生长大肠菌群菌落不超过200个。 滤膜及滤器的灭菌：121℃高压蒸汽灭菌30min。 安装过滤装置：以无菌操作装好过滤装置。;过滤：在滤床上贴放滤膜，将水样注入滤器中，加盖，开动真空泵抽滤。? 培养：将滤膜置于M-FC琼脂或吸收垫表面，于37℃经24h±2h?培养。 计算：大肠菌群菌落在M-FC?培养基上呈蓝色或蓝绿色，计数呈蓝或蓝绿色的菌落，计算出每1L?水样中的粪大肠菌群数。;3. 滤膜法测粪大肠菌群流程;m FC NPS;主要内容;测定粪大肠菌群的培养温度为44.5℃，其余操作不变。 为什么选择大肠菌群作为水的环境卫生学指标？ 多管发酵法测定总大肠菌群的优缺点是什么？ 大肠菌群检测结果表达阴性和未检出有什么区别？ 水中若有大量的致病菌-霍乱弧菌，用此法检测总大肠菌群能否得到阳性试验结果，为什么？