微生物生理—微生物的生长与繁殖.pptx

测定微生物总数 主要内容 显微镜直接计数法 光电比浊计数法 显微镜直接计数法显微镜直接计数法 是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。直接计数法优缺点优点：直观、快速、操作简单。缺点：不能区分死菌与活菌，所得为总数； 不适于对运动细菌的计数。 显微镜直接计数法常用计数器有血球计数板(血细胞计数板)、Petroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等。各种计数板的计数原理相同，只是血球计数板较厚，不能使用油镜观察，只能计数较大的霉菌孢子和酵母菌；而后两种计菌器细菌，可以使用油镜观察，因此可以直接计数细菌。 显微镜直接计数法 血球计数板 Petroff-Hauser计菌器Hawksley计菌器 显微镜直接计数法 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各列有一个方格网。 显微镜直接计数法 每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格：一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格。 显微镜直接计数法计数方法 使用血球计数板计数时，通常数5个中方格的总菌数A，然后求每个中方格的平均值，再乘上大方格（计数室）中方格的数量，就得出一个大方格中的总菌数。数两个大方格总菌数，平均后，再换算成每毫升菌液中微生物细胞的数量。 光电比浊计数法 基本原理：当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度-菌数标准曲线。然后，以样品液所测得的光密度，从标准曲线中查出对应的菌数。 比浊法的优缺点优点：简便、快速、连续测定、适合自动化。缺点：光密度受细胞大小、形态、培养液成分 以及选用的波长的影响； 对于不同微生物的菌悬液要选择相应的 菌株和培养条件制作标准曲线； 对于颜色太深的样品或含其它具有吸光 值的物质不能用此法。 比浊法的操作步骤标准曲线的制作1、血球计数板直接计数：首先采用血球计数直接计数酿酒酵母菌悬液。2、稀释菌液：将上述已知浓度的酿酒酵母菌悬液用无菌生理盐水进行两倍梯度稀释，共稀释6个浓度。3、测OD值：以无菌生理盐水作为对照，于波长560nm处用1cm比色杯测定上述各菌液的OD值。4、以OD值为纵坐标，每毫升菌数为横坐标，绘制标准曲线。 比浊法的操作步骤样品的测定1、稀释样品：将待测菌悬液用无菌生理盐水适当稀释。2、在560nm波长用1cm比色皿测定稀释后菌悬液的光密度。3、计算：根据所测得的光密度值，从标准曲线查得每毫升的含菌数，乘以稀释倍数就得到原液中细菌数。 小结 1)显微镜直接计数法：直观、快速、易操作；不能区分死菌和活菌，也不适于运动细菌的计数； 2)光电比浊计数法：简便、快速适合连续自动化；影响光密度的因素较多，对标准曲线的制作要求较高，对于颜色太深或含其它具有吸光值物质的样品不能用此法。 测定活菌数和生长量 主要内容1 活菌数测定法2 测定微生物生长量 1 活菌数测定法1.1 平板菌落计数法1.2 液体稀释测定法1.3 膜过滤计数法 1.1 平板活菌计数法b.稀释倒平板法 操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！a.涂布平板法 使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！ 1.2 液体稀释测定法 测定不占优势，但具有某种特殊生理功能的类群。X 5X 5X 5X 5 稀释度????????? 10-3??? 10-4??? 10-5??? 10-6??? 10-7?? 10-8 重复数??? ??? ? 5????? 5????? 5????? 5????? 5???? 5? 出现生长的管数? 5????? 5????? 5????? 3????? 1???? 0 1.3 膜过滤计数法硝酸纤维素膜测定空气、水等含菌量低的样品当中的活菌数 2 测定微生物生长量2.1 重量测定法2.2 细胞组分含量测定法2.3 菌丝长度测定法2.4 生理指标测定法 2.1 重量测定法 将一定体积样品中的菌体通过离心或过滤的方法分离出来，用水洗净附在细胞表面的残留培养基，