一氧化氮作用前后角质形成细胞差异蛋白的筛选与分析的中期报告.docxVIP

一氧化氮作用前后角质形成细胞差异蛋白的筛选与分析的中期报告 该研究旨在研究一氧化氮（NO）在角质形成过程中的作用机制，通过筛选差异表达的蛋白质，进一步深入了解NO参与角质形成的信号转导通路。本次中期报告将着重介绍实验设计和实验进展情况。 实验设计： 1、培养正常人皮肤角化细胞系HaCaT，将HaCaT细胞分为对照组和NO注射组。 2、NO注射组：将NO处理的HaCaT细胞分为3组，分别处理1h、6h和12h；对照组：未注射NO的HaCaT细胞也分为3组，分别处理1h、6h和12h。 3、通过二维凝胶电泳技术分离差异蛋白质，利用MALDI-TOF/TOF质谱鉴定差异蛋白质。 实验进展： 1、成功培养HaCaT细胞系，证明细胞活力良好。 2、使用NO供体丙烯酰胺（SNAP）处理HaCaT细胞，测试不同浓度NO的处理时间。 3、通过MTT实验确定NO的处理浓度和时间，在保证细胞活力的前提下使NO达到最佳作用效果。 4、利用2D-gel技术分离对照组和NO注射组的蛋白质样品，得到千克级别的差异蛋白质，通过MALDI-TOF/TOF质谱进行鉴定。 5、初步分析差异蛋白质的功能，筛选出可能参与NO参与角质形成的细胞信号转导通路的蛋白质。 下一步计划： 1、加强差异蛋白质的质谱鉴定，提高准确率。 2、进一步分析筛选出来的蛋白质的功能和相互作用信息。 3、通过Western blot验证差异蛋白质