培养细胞的生物学特点余莉.pptVIP

霉菌污染容易发现，大多形成白色或浅黄色菌团漂浮于培养液表面，肉眼可见，有的散在生长，镜下可见丝状菌丝，纵横交错于细胞之间。 2009/12/04 本文档共179页；当前第126页；编辑于星期二\0点45分 常 见 真 菌 形 态 2009/12/04 本文档共179页；当前第127页；编辑于星期二\0点45分 真菌污染的成纤维细胞 2009/12/04 本文档共179页；当前第128页；编辑于星期二\0点45分 白假丝酵母菌污染 2009/12/04 本文档共179页；当前第129页；编辑于星期二\0点45分 细菌污染如果较严重时培养基上清混浊，较轻时镜下可见小的菌体在细胞间运动，同时可涂片染色镜检或进行细菌培养基培养，加以确定。 2009/12/04 本文档共179页；当前第130页；编辑于星期二\0点45分 支原体（杂草） 支原体污染 biological contamination 2009/12/04 本文档共179页；当前第131页；编辑于星期二\0点45分 2009/12/04 本文档共179页；当前第132页；编辑于星期二\0点45分 支原体（杂草） 支原体污染 biological contamination 污染严重 难发现 难去除 显微镜看不到 不引起培养液浑浊和PH改变 营养要求高不容易用传统的微生物培养法检测到 不能通过过滤清除 大多数抗生素对其无效 2009/12/04 本文档共179页；当前第133页；编辑于星期二\0点45分 支原体污染来源 人体的组织及体液成分是细胞培养中支原体污染的主要来源。污染的细胞中通常能分离到人类口腔支原体、发酵支原体、唾液支原体以及其它一些与人有关的支原体，操作过程中，操作者能产生有污染性的随空气传播的飞沫和微粒，造成培养体系的污染。 培养体系中支原体污染的最可能途径是经已被支原体污染的细胞扩散和传播。 牛血清中能分离到A.laidlawii、M.arginini和M.hyorhinis支原体，因此血清可能成为支原体污染的来源 2009/12/04 本文档共179页；当前第134页；编辑于星期二\0点45分 支原体污染危害 1）杂交瘤技术 1　融合细胞无分泌单抗的能力2　杂交瘤细胞产生的单抗不是针对靶抗原，而是针对支原体3　支原体消耗胸腺嘧啶，干扰HAT*筛选4　在HAT筛选过程中丧失了杂交瘤细胞 2）细胞遗传学 1　造成羊水污染2　姊妹染色单体交换增多3　染色体随机断裂和畸变增多4　产生额外的染色体5　干扰羊水培养的结果6　精子污染后受精能力下降7　染色体数目减少 2009/12/04 本文档共179页；当前第135页；编辑于星期二\0点45分 3）病毒学 1　转录酶活性下降2　干扰某些逆转录病毒的分离3　降低禽痘病毒的感染力及空斑的形态4　诱导人单核细胞产生干扰素5　抑制腺病毒的增殖6　诱导小鼠脾细胞产生干扰素7　污染病毒疫苗8　引起巨细胞病毒及带状病毒形成假空斑9　降低腺病毒及SV40胸腺嘧啶的掺入10　抑制腺病毒和单纯疱疹病毒的增殖11　抑制脊髓灰质炎病毒和牛痘病毒的增殖12　支原体与病毒在蔗糖梯度离心中共沉淀13　抑制新城病病毒（NDV）产生干扰素 支原体污染危害 2009/12/04 本文档共179页；当前第136页；编辑于星期二\0点45分 4）代谢 1　降低鸟氨酸脱羧酶的产生2　降低蛋白质和RNA的产生3　消耗培养液中的精氨酸4　改变尿苷／尿氨酸的比例5　降低DNA和RNA的合成6　增加胸腺嘧啶的降解7　诱导3T3细胞产生胶原酶8　增加致癌物诱导芳香烃羟化酶的产生9　促进淋巴瘤细胞的增殖10　降低嘌呤替代途径11　降低ATP水平 5）生物反应性 　引起鼠的淋巴细胞发生转化 支原体污染危害 2009/12/04 本文档共179页；当前第137页；编辑于星期二\0点45分 支原体污染检测　 由于支原体污染并不引起细胞外观的明显变化，故常规的支原体检测非常必要的。人们可利用一系列直接或间接的方法检测支原体。但由于支原体种类的多样性，目前还没有一种方便、广谱、特异性高、准确的检测方法。因此，有必要对不同检测方法的灵敏度及局限性有所了解。 2009/12/04 本文档共179页；当前第138页；编辑于星期二\0点45分 支原体检测方法 支原体污染检测 biological contamination 方法 敏感性 优点 缺点 直接DNA染色 (如Hoechst33258) 低 快速，便宜 需要