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cf7l2基因多态性与2型糖尿病遗传易感性的关系 t2dm是一种异质性遗传疾病。在国外的许多研究中，tf7l2基因与t2d的发生密切相关，但尚不清楚中国汉族是否能够成为主要的2型糖尿病候选人。本研究探讨该基因SNP rs7903146、r我国汉族人群中的分布情况及与T2DM遗传易感性的关系。 对象和方法 一、 ho诊断标准 1 535例无血缘关系江苏地区汉族人中,根据1999年WHO诊断标准确诊为T2DM的患者682例,平均年龄63±13岁;糖耐量减低(IGT)者302例,平均年龄53±11岁;正常糖耐量(NGT)者551例,平均年龄46±11岁。 二、 pcr和fpg检测参数 1.外周血白细胞DNA抽提:取EDTA抗凝血5ml,常规酚-氯仿法抽提基因组DNA。 2.TCF7L2基因单核苷酸多态性分析:采用高温连接酶反应(LDR)技术,引物及探针序列见表1。 多重PCR反应条件:20μl反应体系中含10×Buffer 2.0μl,Mg2+1.2mmol/L,dNTPs 200μmol/L,热启动Taq酶1U,上下游引物各0.5μmol/L,模板DNA约100ng。扩增条件:95℃预变性15min;94℃变性30s,59℃退火1min,72℃延伸1min,共35个循环;72℃7min。 LDR反应条件:5μl反应体系中含探针各0.1rnmol/L 10×Buffer 0.5μl,热启动Taq酶0.05U,多重PCR产物1μl。循环条件:94℃2min;94℃40s,60℃2min,共35个循环。采用ABI PRISM 377 DNA Sequencer进行测序反应,Genemapper软件进行数据分析。 3.临床检测及计算指标:所有受试者测量身高、体重,计算BMI;葡萄糖氧化酶法测定FPG;发光免疫法测定FIns。 三、 统计学处理方法 计算TCF7L2基因型频率及等位基因频率,并确认其符合Hardy-Weinberg平衡。应用SPSS10.0统计软件,基因型及等位基因频率比较采用卡方检验,Logitic回归分析风险等位基因参与疾病发生的相对风险(OR),临床指标比较用one-way ANOVA方差分析或卡方检验。人群归因危险度(PAR)=[p(OR+1)]/[1+p(OR-1)],其中p为风险等位基因频率。 结果 一、 各组的临床特点 各组一般情况及FPG、FIns水平见表2。 二、 tp/cc结构 SNP rs7903146为C/T多态,本研究所有样本均未发现TT型突变纯合子,故LDR反应产物长度(LDR length)为82/82bp(CC纯合子)或82/85bp(CT杂合子)。SNP rG/T多态,本研究所有样本也没有发现TT型突变纯合子,故LDR反应产物长度为88/88bp(GG纯合子)或88/91bp(GT杂合子)(图1)。本研究中应用LDR法rs7903146位点基因分型成功率为98.1%(1535/1565),r点基因分型成功率为97.8%(1530/1565)。 三、 糖代谢异常组3.4基因型及等位基因频率分布 1.在1 535例汉族人中,共检测到CT基因型95例,C等位基因频率为96.9%,T等位基因频率为3.1%。 2.T2DM组与IGT组CT基因型频率分别为7.2%和7.0%,均高于NGT组的4.5%,组间差异无统计学意义(与NGT组比较,P值分别为0.052和0.135)表3)。 3.T2DM组及IGT组T等位基因频率分别为3.6%和3.5%,均高于NGT组(2.3%),但差异无统计学意义(与NGT组比较,P值分别为0.055和0.141)(表3)。 4.糖代谢异常组rs7903146基因型及等位基因频率分布情况:将T2DM组与IGT组合并为糖代谢异常组,其CT基因型频率显著高于NGT组(P=0.044),T等位基因频率亦显著高于NGT组(P=0.048),差异有统计学意义(表4);T等位基因参与糖代谢异常发生的相对风险(OR)为1.589(95%CI=1.000～2.524),人群归因危险度(PAR)为2.1%。 四、 t等位基因频率 本研究中共检测到17个GT突变杂合子,T等位基因频率仅为0.55%,远远低于欧美白种人及日本黄种人,且不构成SNP,未进行进一步分析。 中国少数民族糖代谢异常人群的tcf7l2基因 TCF7L2基因位于人类染色体10q25,其编码的蛋白质为β连环素的核受体,是介导WNT信号通路的关键蛋白,作为细胞内重要的转录因子调控胰升糖素原基因的转录,从而调节肠道L细胞合成胰升糖素样肽1。 2006年Grant等首先报道TCF7L2基因与2型糖尿病的发生强烈相关,这一结果随后在多个人群中得到证实,研究发现TCF7L2基因参