解旋酶RecQL4出核机制的研究及分离纯化线粒体的新方法的建立的中期报告.docxVIP

解旋酶RecQL4出核机制的研究及分离纯化线粒体的新方法的建立的中期报告 该研究课题的中期报告包含以下两个方面的内容： 1. 解旋酶RecQL4出核机制的研究 RecQL4是一种重要的解旋酶，在维护基因组稳定性中扮演重要角色。为了研究RecQL4在DNA修复中的生物学功能和分子机制，在该课题中开展了解旋酶RecQL4出核机制的研究。 目前，在原核生物中关于解旋酶的出核机制研究较为充分，但在真核生物中尚未有详细的研究报道。因此，该研究首先构建了原核表达系统，重组了人类RecQL4蛋白质，并利用纯化技术获得高纯度的蛋白质。 通过透射电镜技术和动力学实验，研究了RecQL4蛋白复合物的结构特征和解旋酶活性。利用荧光共振能量转移（FRET）实验研究了RecQL4与DNA单链结合的亲和力和运动学参数，揭示了其出核机制。 2. 分离纯化线粒体的新方法的建立 线粒体是真核生物的细胞器之一，具有重要的能量代谢、细胞信号传导等多种生命活动功能。该研究中建立了一种新的方法，利用不同离子强度实现了对线粒体的快速分离和高通量纯化。 该方法通过缓慢加入NaCl和KCl离子，在离子强度适宜的条件下，线粒体能够快速从细胞裂解物中分离出来，同时减少了细胞裂解产生的碎片和杂质对线粒体纯度的影响。使用新的分离方法，我们可成功获得高质量的线粒体，为后续的线粒体研究提供了良好的基础。