一氧化氮与催产素在大鼠下丘脑神经内分泌调节中的作用.docxVIP

一氧化氮与催产素在大鼠下丘脑神经内分泌调节中的作用 广泛深入地研究了大细胞内收率（ot）免疫阳性因子的分布以及纤维投影。这些研究成果为进一步研究脑瘫神经垂体的分泌调节机制提供了详细的力学数据。近十年来的研究证实,一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元在脑内分布十分广泛,合成与释放的一氧化氮(NO)作为一种新型神经递质与气体信息分子,具有极强的弥散性与渗透作用,可通过非突触方式发挥信息传递作用,从而在一定程度上改变了传统的神经递质突触联系进行信息传递的作用方式。因此进一步研究NO与其它神经递质相互的分布范围与共存关系,对构建新型神经网络学说有着重要意义。本文详细观察了下丘脑大细胞分泌系统中一氧化氮合酶阳性神经元与催产素免疫阳性神经元的分布与共存情况。为阐明有关NO、OT参与下丘脑对生殖与性行为的神经内分泌调节机制提供了基本的形态学证据。 1 在免疫组化染色中的表达 雌雄两性SD大鼠8只,体重180～250 g。按常规免疫组织化学方法灌注、取材,将含下丘脑的组织块行恒冷箱冠状连续切片(厚15 μm),分3组贴片(1)黄递酶(NADPH-d)组织化学染色组;(2)NADPH-d+OT双标染色组;(3)OT免疫组织化学染色组。染色:(1)与(2)组切片加入反应液37℃避光孵育45 min,反应液的组成:0.1 MPBS,pH 8.0,含0.3% Tirton X-100,0.6 mg/ml硝基四氮唑蓝(NBT,南京建成生物试剂公司),0.5 mg/ml NADPH-d(Sigma产品),反应后用pH 7.4的PBS充分漂洗。(2)与(3)组一同进行OT免疫组织化学反应:切片经正常羊血清(1∶200)处理30 min后入第一级兔抗OT血清(1∶1 000)(Sigma产品)4℃孵育72 h,经PBS漂洗,行ABC(Vector产品)免疫反应,DAB/H2O2溶液(0.05%/0.01%)室温孵育约15 min,再经PBS漂洗终止反应。对上述切片脱水、透明、封片、光镜观察、计数、摄片。 对照试验,另取一只鼠脑冠状连续切片分4组分别作以下反应。 (1) 抗虫试验 ①空白试验:分别省去两套染色中的NADPH-d、兔抗OT血清,分别孵育切片。②置换试验:用正常兔血清代替第2套染色中的兔抗OT血清。 (2) dab/h0的染色步骤 在第1套染色程序结束后,切片经PBS漂洗,洗后直接进行第2套染色程序中的DAB/H2O2呈色步骤,证实在第1套染色程序后是否有残余的NADPH-d、NBT与第2套程序中的DAB反应而导致反应产物混杂。 2 双标神经元的组成结构 有关下丘脑大细胞分泌系统各核团内的OT神经元的分布已有文献报道,本实验结果与之相似,不作重复叙述;我们既往的实验结果亦已详细的报道了下丘脑各核团NOS神经元分布与形态。本实验着重观察下丘脑大细胞分泌系统中NOS与OT分布相互关系及其共存情况。双标染色结果显示下丘脑大细胞分泌系统各核团中均含有三种阳性标记神经元:紫蓝色的NOS单标记阳性神经元,呈棕黄色的OT单标记免疫阳性神经元,细胞核周围的胞质呈棕黄色、外周的细胞质与突起呈紫蓝色的NOS/OT双标记阳性神经元。上述三种阳性标记细胞数目及比例关系在各核团存在一定的差异,具体分布与形态如下: 室旁核(PVN):NOS/OT双标神经元的胞体呈圆形或椭圆形,突起为双极或单极,多呈背外腹内向,集中分布于PVN的外侧大细胞部,内侧部偶见,但在靠近第三脑室处,亦见少许嵌于室管膜细胞之间呈倒置梨形的大型双标神经元(图1,2)。对4套染色最佳的双标的切片PVN主部平面三种阳性标记细胞进行分类计数,结果显示:双标神经元约占72.3%;OT单标记神经元约占8.6%,散在分布PVN的外侧部;NOS单标记神经元约占19.1%,一部分为大细胞型NOS神经元(胞体平均直径≥20 μm),集中分布于PVN的外侧部的腹侧,突起较长,相互交,另一部分为散在分布于内侧部的小细胞型NOS神经元(胞体平均直径≤10 μm)(图2)。 视上核(SON):NOS/OT双标神经元的胞体多为圆形和卵圆形,少数呈梭形,突起短小,胞体直径一般都较PVN内的双标神经元大。在SON主部NOS-OT双标神经元多位于背内侧部(图3);SON交叉后部,双标神经元呈薄带状位于下丘脑的腹侧边缘,直至正中隆起平面。对4套染色最佳的双标的切片SON主要平面的三种阳性标记细胞进行分类计数,结果显示:双标神经元约占64.2%;OT单标记神经元约占28.7%,集中分布SON的腹侧部;NOS单标记神经元约占7.1%。 室周部(Pe):在视前区至PVN后大细胞亚核平面的第三脑室邻近区域可见三种类型的阳性标记细胞,其中绝大部分为NOS/OT双标神经元,极少部分为OT、NOS单标记阳性神经元(图1,4,5)。NOS/OT双标神经元,大