-氨基丁酸对室旁核神经元放电活动的影响.docxVIP

-氨基丁酸对室旁核神经元放电活动的影响 干预脑瘫室的中心在心血管活动的调节、活动引起的压力、以及针灸和镇痛方面发挥着重要作用。因此,研究神经递质、激素对室旁核神经元的作用,对于阐明下丘脑在针刺镇痛和应激等反应中的机理是很必要的。室旁核神经分泌细胞接受多种神经递质的作用,其中去甲肾上腺素、乙酰胆碱、5-羟色胺等已有文献报道,但用电生理的手段研究GABA对离体下丘脑室旁核神经元放电活动的影响及其机理还未见报道。本实验采用脑薄片细胞外记录技术,研究GABA对下丘脑室旁核神经元放电活动的影响并探讨其作用机理,为全面阐明下丘脑在神经内分泌、针刺镇痛和应激反应中的作用机理提供科学资料。 1 材料和方法 1.1 动物 Sprague-Dawley大鼠,体重80～120 g,雌雄不拘。 1.2 人工瞳片的制备 将大鼠迅速断头,取出脑组织置于1～4℃的人工脑脊液中,根据解剖标志,切下含有下丘脑的组织块,用对组织无损伤的快速粘合剂将组织块粘于振动切片推进台上,切片槽内倒入95%氧和5%二氧化碳饱和过的低温人工脑脊液,沿组织块的冠状面切下厚约300～500 μm的薄片。将脑薄片移至记录浴槽小室的尼龙网上,浸没在恒速灌流的人工脑脊液中。内槽温度一般控制在30～35℃。 1.3 x-y仪扫描自适应放电神经元 下丘脑薄片经过1～2 h孵育后,用玻璃微电极作为细胞外记录电极,在解剖显微镜下,根据组织学的标志,将微电极插到室旁核的区域,寻找自发放电神经元,自发放电通过微电极放大器和直流前置放大器上可以观察,同时输入微机进行实时处理,然后在X-Y仪上描记放电频率密度直方图。每当记录到某个具有自发放电活动的单位时,取3～5 min的放电平均频率做为对照,然后灌流药物,如果放电频率出现与给药有关的明显变化(频率增加或减少30%以上)而且可以重复,则认为这种变化是药物影响的结果。 2 结果 2.1 部位神经元放电动力学 所有实验结果取自60个下丘脑脑薄片。在室旁核这一部位观察了111个具有稳定自发放电活动的神经元,放电形式主要表现为不规则型(61.3%)、周期性放电型(27.9%)和快速连续型(10.8%)。 2.2 灌流浓度对gaba神经元放电频率的影响 观察了室旁核的98个神经元GABA对放电的影响。首先观察5～10 min的放电活动作为对照,然后灌流浓度为10-3mol/L的GABA 1.5～3 min,其中有73个神经元(74%)的放电频率在给药期间明显减少,潜伏期短,呈明显的量效关系,有3个神经元(3%)的放电频率增加,其余22个神经元(23%)给药期间放电频率没有明显的改变(图1)。 2.3 gaba反应的药理学特性 2.3.1 激动器 2.3.2 抗baclofen反应 GABAA受体的特异性的竞争性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline, 10-10mol/L)能完全拮抗蝇蕈醇所引起的抑制反应,不能拮抗Baclofen的抑制反应(图2)。荷包牡丹碱和印防己毒素本身所用浓度范围对神经元放电活动并无影响。 2.4 灌流低钙高镁的神经元放电活动观察 为了观察GABA对室旁核神经元的直接作用及同一室旁核神经元上是否同时存在GABAA和GABAB受体,在记录到神经元的自发放电活动稳定了3～5 min后,给脑片灌流低钙高镁的人工脑脊液6 min,完全阻断了突触传递,这时记录的是单个神经元的放电活动,然后灌流GABA(10-3mol/L,2 min)。观察了20个在此条件下的神经元的放电活动,其中15个(75%)表现为抑制,5个(25%)没有反应。Bic可部分拮抗GABA(10-3ml/L)所引起的抑制反应,而且Baclofen(10-6mol/L)能产生明显的抑制作用(图3)。 3 讨论 3.1 gaba通过局部的神经环路 本实验的结果表明GABA对下丘脑室旁核74%神经元放电活动具有抑制作用,潜伏期很短,药物灌流到脑片就立即起抑制作用。值得注意的是,除抑制作用外,约有3%表现为兴奋有效应,23%效应不明显。GABA对PVN神经元作用的多样化,除了可能与受试细胞的类型有关外,不能排除GABA通过局部的神经环路起作用的可能。在灌流低钙高镁液之后,阻断突触连接,观察到的则是GABA对PVN神经元的直接作用,在这种情况下,未见兴奋效应的单位。 3.2 gabaa受体 本实验中还可观察到,GABA对室旁核神经元的抑制作用,除具有反应的特异性外,还具有明显的浓度依赖性,受试神经元的反应与灌流GABA的浓度具有明显的量效关系。同时,GABA的抑制效应都可以被GABAA受体的特异性拮抗剂荷包牡丹碱和氯离子通道阻断剂印防己毒素部分阻断,这就提示PVN神经元膜上有GABAA受体。另外,在同一神经单位上,GABAA受体的特异性激动剂蝇蕈醇可以抑制PVN神经元的放电活动,并可以完