复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠脑水肿和血-脑屏障通透性的影响.docxVIP

复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠脑水肿和血-脑屏障通透性的影响 糖尿病合并脑梗死是糖尿病最常见、最严重的血管并发症。死亡率高。与非糖尿病性脑病相比，糖尿病脑梗死的发病率和死亡率是非糖尿病性脑病的2.4倍。脑梗死是由于脑动脉粥样硬化, 使脑动脉管腔狭窄, 血管内膜损伤, 合并多种因素致局部血栓形成, 加重脑动脉狭窄甚至完全闭塞, 导致脑组织缺血缺氧和坏死, 进而引起各种神经功能缺损的一种脑血管病。我们长期临床应用复元醒脑汤治疗脑梗死取得了显著的临床效果, 为了进一步探讨复元醒脑汤对脑梗死治疗的作用机理, 本实验拟在建立糖尿病脑梗死大鼠模型的基础上, 观测复元醒脑汤对其神经功能缺损、脑组织含水量、血-脑通透性改变的干预作用。 1 实验材料 1.1 实验动物及其他 选用120只SPF级雄性SD大鼠, 体重 (200±20) g, 购买于上海斯莱克实验动物有限责任公司, 饲养于上海中医药大学附属龙华医院科技楼实验动物中心, 动物合格证号:SCXK (沪) 2011-009。 1.2 生物粉使用剂量 复元醒脑汤, 药物组成:人参10g (单煎) 、三七10g、石菖蒲12g、水蛭10g、益母草30g、生南星15g、制大黄9g (后下) , 由本院制剂室生产提供, 浓度为388g生药/L。 1.3 siga-aldricau2004 FA2004B电子天平, 上海精密科学仪器有限公司;大鼠脑立体定位仪, 深圳市瑞沃德生命科技有限公司;STZ, Sigma-Aldrich Inc (USA) ;凝血酶, Sigma-Aldrich Inc (USA) ;恒宇电热恒温鼓风干燥箱, 上海跃进医疗器械厂;紫外分光光度计, 美国贝克曼库尔特公司生产。 2 实验方法 2.1 模型准备 2.2 大鼠脑梗死超早期手术的分组 在常规适应性分笼喂养后按照正常组24只、糖尿病模型组96只进行随机分组, 糖尿病模型组采用STZ腹腔注射法制糖尿病模型, 造模成功后, 连续高脂饮食饲养2周, 再从中随机选取72只大鼠按糖尿病脑梗死模型组 (简称模型组) 24只、糖尿病脑梗死假手术组 (简称假手术组) 24只、糖尿病脑梗死治疗组 (简称治疗组) 24只进行随机分配, 其余24只作为糖尿病组。完成造模后, 治疗组每日按10.4g/kg体重, 2次/d给予复元醒脑汤灌胃 (参照陈奇主编《中药药理实验方法学》依实验动物与人体表面积比计算) , 模型组、假手术组、糖尿病组和正常组予等容量的生理盐水灌胃, 连续饲养7d。 2.3 观察指标和方法 2.3.1 神经缺损及阻力 治疗后每组随机选取12只大鼠进行评分 (根据Bederson等神经缺损行为体征评分法) :轻提鼠尾, 使其头部高于地面10cm, 正常大鼠两侧前爪前伸。0级 (0分) :无明显神经缺损症状;Ⅰ级 (1分) :梗死对侧前肢回收屈曲内收, 同侧前肢向地面伸展;Ⅱ级 (2分) :Ⅰ级体征+俯卧于桌面时从梗死侧向对侧推动大鼠时阻力降低;Ⅲ级 (3分) :Ⅰ级体征+Ⅱ级体征+大鼠行走时向梗死对侧肢体旋转 (呈追尾状) 甚至倾倒。分值≥1分, 为模型制作成功。 2.3.2 脑含水量检测 脑组织含水量采用干湿脑重法测定。中药灌胃治疗7d后, 每组随机选取6只大鼠, 腹腔注射10%水合氯醛麻醉后处死, 迅速断头开颅取脑, 取血肿周围脑组织约100mg (各组取相应部位脑组织) , 用电子天平先称取湿重, 然后放入电热恒温鼓风干燥箱在100℃下烘烤24h至恒重再称取干重, 脑组织含水量计算公式:脑组织含水量= (湿脑重-干脑重) /湿脑重×100%。 2.3.3 pcr和cu 中药灌胃治疗7d后, 每组各取6只大鼠, 10%水合氯醛腹腔注射麻醉, 在腹股沟处切开皮肤暴露股静脉, 注入2%伊文思蓝 (20mg/kg) 循环20min, 迅速剪开肋骨暴露出心脏, 将灌注针头插入左心室, 用动脉夹夹闭降主动脉, 然后在右心耳处剪口, 快速从左心室灌注生理盐水总量约100m L, 至右心耳流出无色液体后, 迅速开颅取脑。各组均摘取相应部位血肿脑组织, 称重后浸入甲酰胺中, 在54℃恒温水浴箱中孵育48h后, 以3500r/min转速离心15min, 将取其上清液置于紫外分光光度计 (λ=632nm) 下进行光密度值 (OD) 测定。脑组织中伊文思蓝含量以OD/g湿脑组织表示, 以伊文思蓝含量 (OD/g) 代表脑血管通透性。 2.4 统计学处理方法 应用SPSS18.0统计软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以 (x±s) 表示, 组间均数比较采用独立样本t检验;等级资料采用Ridit分析。检验效能以P0.05为差异具有显著性, P0.01为差异具有非常显著性。 3 结果 3.1 表1显示了神经缺损综合征的评分 3.2 大鼠颈内动脉