海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备的中期报告.docxVIP

海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备的中期报告 中期报告 本研究旨在通过原核表达系统和纯化技术制备海州香薷金属硫蛋白，并利用其制备多克隆抗体。在前期研究中，我们克隆了目标基因并成功构建了原核表达载体，并通过菌落PCR鉴定出了阳性克隆。本中期报告主要介绍了后续的表达和纯化等步骤的进展情况。 1. 原核表达 我们利用大肠杆菌BL21（DE3）作为表达宿主菌，将重组表达载体转化进入菌中，经过初始培养后加入IPTG诱导表达。在诱导条件优化后，我们通过SDS检测发现，目标蛋白成功表达，分子量符合预期。同时，我们还进行了Western blot和His标签检测，证实蛋白的表达与纯化效率较高。 2. 蛋白纯化 目标蛋白在表达后以包涵体的形式存在，在诱导后我们将菌体收获并经过超声破碎、高速离心和Ni-NTA亲和层析等步骤纯化出目标蛋白，在分别进行梯度洗脱和吸附剂竞争洗脱后，我们选用1mol/L的解离剂进行洗脱，得到了高纯度的目标蛋白，纯化效率达到了85%。 3. 免疫原性检测 为了验证纯化出的蛋白是否具有较好的免疫原性，我们将目标蛋白注射到小鼠体内，分别于第0、7、14和28天采集血清，进行Western blot和ELISA检测。结果显示，注射后小鼠体内产生了高免疫力，并且对目标蛋白有较好的识别和结合能力。 4. 多克隆抗体制备 基于免疫原性检测结果，我们随后进行多克隆抗体的制备。抗原冻干粉溶解后，与小鼠免疫进行后期的动物免疫操作，随后用ELISA筛选阳性小鼠，接着进行脾细胞融合、筛选和扩增、亚克隆抗体纯化等步骤，最终获得了高效、特异性较好的多克隆抗体。 综上，我们成功进行了海州香薷金属硫蛋白的原核表达纯化，并利用其制备多克隆抗体。下一步，我们将进一步进行抗体的性质和特性的研究和应用。