重组蛋白表格达系统选择.docxVIP

重组蛋白表达系统的选择、表达策略和方法学研究 张宁 序言 在生命科学的好多研究和应用领域中，如何获取大批、均一、高纯、有活性的蛋白质 都是一个重点问题。现代重组蛋白表达技术为我们供给了多种选择：传统的大肠杆菌、酵母、 昆虫和哺乳动物细胞表达系统以及较新的植物和体表面达系统。每种表达系统都有好多成功 的例子，但重组蛋白的个性不尽相同，没有任何一个系统和方法是广泛合用的，为目的蛋白 选择一个合适的表达系统也就成为表达工作的重中之重。 对于目的蛋白的全部信息，对表达系统的选择都是有帮助的，有几个最基本的问题一 定要在表达以前回答清楚：目的蛋白的根源是原核还是真核生物？拥有什么样的功能？分子 量和聚合状态？是膜蛋白还是水溶蛋白？胞内表达还是分泌表达？能否需要以及需要何种 翻译后修饰？有没有配体、底物或产物近似物能够利用？对蛋白酶能否敏感？有多少分子内 及分子间二硫键？对目的蛋白的表达量、活性、表达速度和成本有如何的要求？除了摸清目 的蛋白的脾气，还要清楚各个表达系统的特色、优势和限制性，才能找到表达工作的大概方 向，要获取最合适目的蛋白的表达方案，还需要在详细实验中调整优化。 表1比较了当前常用的表达系统的特色，并给出了大概的合用范围。 大肠杆菌 酵母 昆虫细胞 哺乳动物细胞 流程 简单 简单 复杂 复杂 培育基 简单 简单 复杂 复杂 成本 低 低 中 高 产率 高 中 中 低 表达量