《牛羊巴氏杆菌病分型诊断技术规程》.pdfVIP

ICS ICS 01.040.65 CCS B 04 TB 团 体 标 准 T/ NAIA×××-×××× 牛羊巴氏杆菌病分型诊断技术规程 Technical specification for classification and diagnosis of pasteurellosis in cattle and sheep (征求意见稿) ××××- ××- ××发布 ××××- ××- ××实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布 牛羊巴氏杆菌病分型诊断技术规程 1 范围 本文件规定了规模化牛场羊场牛羊巴氏杆菌病分型诊断与防治技术的术语和定义、流行病学、 病理变化、分型诊断的技术规程。 本文件适用于规模化牛场羊场牛羊巴氏杆菌病分型 TaqMan qPCR 鉴别诊断的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用 文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 564 猪巴氏杆菌病诊断技术 NY/T 5030 无公害农产品 兽药使用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 多杀性巴氏杆菌 Pasteurella multocida, P.multocida 是指主要存在于动物口腔、鼻咽和上呼吸道，可引起多种家畜、野生动物及人类的感染的一种 重要的人畜共患疾病病原体。 4 仪器 4.1 革兰氏染液； 4.2 PCR 预混液； 4.3 DL-500 DNA Maker ； 4.4 pMD18-TVector ； 4.5 Taq-HS Probe qPCR Premix ； 2 4.6 二氧化碳培养箱； 4.7 恒温震荡摇床（QYC-200 ）； 4.8 CFX96Real-timePCR 仪； 5 诊断 5.1 流行病学 多杀性巴氏杆菌病通常无明显季节性，主要呈散发或地方流行性特征。封闭潮湿的气候条件下， 应激和动物的整体健康不良情况本病更易发生，寒冷季节呈散发。诱发因素是病毒混合感染、断奶 应激、管理不善、饮食改变、天气变化和运输等。 5.2 临床症状 感染特征是急性呼吸道疾病，伴有高热、流鼻涕、大量流涎，随后迅速出现呼吸窘迫、脓毒性 休克，伴有出血，短时间内死亡。潜伏期一般为 2-5 天，幼畜抵抗力较弱，较为易感。由于急性脓 毒症发病较快，常迅速死亡，发病后死亡率接近 100 % 。 5.3 病理变化 气管、肺、小肠和肝脏的极度充血。 5.4 细菌分离及培养 巴氏杆菌培养基配制见附录A.1 ，实验用水应符合GB/T 6682规定。 牛羊动物采样选取精棉迅速擦去其鼻口周围的污物，选用一次性无菌棉签，插入牛羊鼻腔内 5～ 10 cm 深度，轻轻旋转后抽出棉签，并置于装有 2mL 生理盐水的无菌管中，按照 NY/T 541 规定贮 存样品。后将采样物接种于 5%脱纤维羊血固体培养基的样品在 37 ℃恒温培养箱中培养 24 h 后，培 养基上可观察到淡灰白色、边缘整齐、表面光滑、粘稠、湿润的露珠状小菌落，无溶血现象。菌落 形态参见 B.1 。 5.5 革兰氏染色及镜检 用无菌接种环取一环无菌生理盐水在洁净载玻片上涂布呈直径 1 cm