毕赤酵母产木聚糖酶实验方案.docxVIP

重组毕赤酵母产木聚糖酶摇瓶培养实验 毕赤酵母简介 甲醇营养型毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是80年代初被开发和研制 的一种新型酵母表达系统。40年前，Ogata等人首次发现有些酵母能够利用甲醇 作为唯一的碳源和能源进行生长。随后，甲醇营养酵母作为潜在的单细胞蛋白 (single cell protein, SCP)来源立即引起广泛关注，最初将其作为高蛋白的动物饲 料在市场上销售。在20世纪70年代，Phillips Petroleum公司开发出毕赤酵母利 用甲醇生长的培养基、发酵操作手册和高密度连续培养生产工艺。70年代的石 油危机导致了甲烷价格的急剧上升，与此同时，动物饲料蛋白的主要替代源一 —大豆价格的下降，导致利用甲醇生产SCP在经济上已不再合适。在以后的10 年中，PhiLLips PetroLeum公司与SIBIA公司合作开发利用毕赤酵母作为生物体 表达外源蛋白的研究，研究人员分离了醇氧化酶(alcohol oxidase, AOX)的基因 和启动子，构建了表达载体和菌株，开发了毕赤酵母基因操作相关技术。成熟 的SCP发酵方法的开发，加上醇氧化酶强启动子的可调控表达特性，极大地影 响着外源蛋白在毕赤酵母中的高水平表达。1993年，Phillips Petroleum公司委托 Invitrogen公司代理毕赤酵母表达系统产品。 毕赤酵母能在以甲醇为唯一碳