莲子去心的化学法及生物活性成分测定.docxVIP

莲子去心的化学法及生物活性成分测定 荷花是睡莲科多年生水生草本植物的一种常见药物。它对肾脏和血液有很好的补充，可以补充脾脏、止泻药、止泻药和改善情绪。常用。其主要成分为初生代谢产物, 有效成分尚不明确, 但糖可能是其补益作用的主要因素之一。本文采用DNS法对其还原糖、可溶性糖、多糖、总糖进行了测定。 1 仪器和试剂盒 1.1 医用数控超声清洗器 ① 仪器:UV-1600紫外可见分光光度计由北京瑞利分析仪器公司提供;KQ2200DE医用数控超声清洗器由昆山市超声仪器有限公司提供。② 材料:莲子 (去心) 产地福建建瓯。② 化学试剂:NaOH、Na2SO3、酒石酸钾钠、结晶酚、乙醇、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉均为CR级, 3, 5-二硝基水杨酸为CP级。 1.2 酒石酸钾钠的制备 甲液:溶解2.3 g苯酚于5 ml 10% NaOH中并稀释到23 ml, 在此溶液中加入2.3 g Na2SO3;乙液:称取85 g酒石酸钾钠加入100 ml 10%的NaOH中, 再加入293 ml 1%的3, 5-二硝基水杨酸溶液。将甲、乙溶液相混合, 即得黄色溶液, 贮于棕色试剂瓶, 室温下阴暗处放置7~10 d后使用。 1.3 葡萄糖溶液的制备 精密称取105℃恒重过的葡萄糖0.0495 g, 于烧杯中溶解, 转溶于100 ml量瓶, 稀释至刻度。 2 方法 2.1 方法研究 2.1.1 显色剂波长的确定 精密移取葡萄糖标准液、蒸馏水各1 ml分别置于25 ml量瓶中, 再各加1 ml DNS, 沸水浴5 min, 流水冷却, 蒸馏水定容。以显色剂-水、葡萄糖显色液-水、葡萄糖显色液-显色剂 (后者为参比) 在波长300~800 nm范围内分别进行扫描, 结果见图1。 由图可以看出, 在波长550 nm前, 显色剂的干扰严重, 故测量波长应为550 nm, 而不是480 nm (最大吸收波长) 。 2.1.2 稳定性研究 2.1.2. lds的水浴时间 精密移取葡萄糖标准液、蒸馏水各1 ml分别置于25 ml量瓶中, 再各加1 ml DNS (共10份) , 沸水浴5~45 min, 流水冷却, 定容。以空白为参比, 在波长550 nm处测定其不同水浴时间的吸光度, 结果见图2。 由图可以看出, 随着时间的延长, 吸光度变大, 但在3~10 min内, 吸收值较稳定。 2.1.2. u3000dna的制备 精密移取葡萄糖标准液、蒸馏水各1 ml分别置于25 ml量瓶中, 再各加1 ml DNS, 沸水浴5 min, 流水冷却, 定容。在波长550 nm处测定其2 h内不同放置时间的A值, 结果见图3。 由图可以看出, 随着时间的延长, 显色液吸光度略有减小, 但在20 min内较为稳定。 2.1.2. ds用量的确定 精密移取DNS显色液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 ml于25 ml量瓶中, 准确加入葡萄糖标准液1 ml, 沸水浴5 min, 流水冷却, 定容。以空白为参比, 在波长550 nm处测A值, 结果见图4。 由图可以看出, 在DNS用量小于1 ml时, 随着其用量的增加, 显色液的吸光度 显著增大;大于1 ml时, 吸光度增大不明显。故DNS用量应不小于1 ml, 且用量应尽量保持一致。 2.2 ds-ms/ms法 准确移取葡萄糖标准液 (0.495 mg/ml) 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml于25 ml量瓶中, 分别准确加入DNS显色液1.0 ml, 再用蒸馏水补至5 ml, 沸水浴5 min, 流水冷却, 定容。以空白为参比, 在550 nm处测定吸光度, 结果分别为0、0.0982、0.2002、0.3147、0.4375、0.5534、0.6814。以吸光度为y轴, 浓度 (μg/ml) 为x轴建立标准曲线的回归方程:y=0.0112x (r=0.9983,n=7) 。 2.3 样品测定 2.3.1 还原糖a液的测定 准确称取莲子2 g (5份) 于50 ml锥形瓶中, 以20 ml 80%的乙醇60℃下超声30 min, 过滤, 滤渣再用10 ml 80%乙醇同样条件下超声15 min, 过滤, 合并滤液置于50 ml量瓶中, 定容, 得A液。① 还原糖的测定 精密移取A液3 ml于25 ml量瓶中, 准确加DNS显色液1 ml, 蒸馏水1 ml, 按标准曲线项下操作。② 可溶性糖的测定 精密移取A液5 ml于25 ml试管中, 加入5%盐酸4 ml, 沸水浴10 min, 冷却, 加酚酞1滴, 用10% NaOH滴至微红, 过滤, 滤液置于25 ml量瓶中, 定容, 得B液。精密移取B液2 ml于25ml量瓶中, 准确加入DNS显色液1 ml, 蒸馏水2 ml, 按标准曲线项下操作。