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hplc法测定青龙衣中胡桃的含量 龙庆银器是桃科植物的一种晚熟外果皮。它具有辛、苦、涩、有毒、微寒等肿瘤作用。它被用作皮肤伤口、湿疹、囚犯和其他疾病。龙庆银器的开发具有很高的应用价值和市场前景。胡桃醌为青龙衣中一种含量高且非常有效的成分, 笔者建立了用高效液相色谱仪测定青龙衣中胡桃醌含量的方法。 1 高效液相色谱法 高效液相色谱仪, SPD-10 A检测器, LC-10 A泵, Chromatopa色谱处理机 (日本岛津) ;青龙衣:采于黑龙江省阿城市亚沟镇, 经加工制成;胡桃醌对照品由中国药品生物制品检定所提供;磷酸二氢钠为分析纯;甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 流动相、检测波长 色谱柱:Shimpack-ODS反相色谱柱 (5 μm, 150 mm×4.6 mm) ;流动相:甲醇-5%磷酸二氢钠 (3∶1) ;检测波长:250 nm;流速:0.8 ml/min;柱温:室温;进样量:10 μl。 2.2 标准曲线的绘制 精密称取对照品, 加甲醇溶解并稀释成浓度为1.210 mg/ml的溶液, 用移液管分别取0.5 ml、1 ml、1.5 ml、2.5 ml、5 ml置于10 ml的容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 使浓度达0.0605、0.1210、0.1815、0.3025、0.6050 mg/ml, 分别取10 μl依次进样, 以峰面积值对样品浓度绘制标准曲线为Y=809630X-20.41, r=0.9995, 线性范围0.0605 mg/ml~0.6050 mg/ml。 2.3 索氏抽提法 精密称取青龙衣生药1 g, 研碎后, 用滤纸包裹, 置于索氏提取器中, 加入80 ml氯仿, 水浴加热提取至溶液颜色变淡为止, 过滤, 置于100 ml的容量瓶中用少量氯仿洗涤索氏提取器, 过滤并入容量瓶中, 用氯仿定容至刻度, 混匀, 用移液管精取10 ml, 置10 ml离心管中、水浴蒸干, 加甲醇3 ml超声提取10 min, 4000 r/min离心10 min, 取上清液, 同法再用甲醇3 ml提取2次, 上清液合并于10 ml的容量瓶中, 用甲醇定容, 进样前用0.45 μm微孔滤膜过滤。 2.4 进样次数试验 取浓度为0.0605 mg/ml、0.1815 mg/ml、0.6050 mg/ml供试液 (低、中、高) 按上述色谱条件连续进样5次, RSD分别为0.78%、0.56%、1.23%。 2.5 药物含量检测 将样品溶液在一定时间内, 测定胡桃醌含量, 发现在甲醇中室温放置, 6 h内检测, 药物含量稳定;在氯仿中室温放置, 3天内检测, 药物含量稳定。 2.6 标准曲线及进样测定 对同一次采集的青龙衣按样品处理方法制备5份供试液, 按上述色谱条件进样, 测胡桃醌的峰面积, 代入标准曲线计算, 胡桃醌的平均含量为0.42%, RSD=1.38%。 2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的青龙衣5份, 每份1 g, 分别精密加入1 ml浓度为1.210 mg/ml标准品溶液, 余下操作按样品制备方法制备加样回收率试验供试品溶液, 按上述色谱条件检测, 平均回收率为97.12%, RSD=1.17%。 2.8 样品含量的测量 按上述样品制作方法及色谱条件对贮存时间不同的样品 (核桃揪的未成熟外果皮干燥品) 中胡桃醌的含量进行了测定, 结果见表。 3 讨论 随着青龙衣贮存时间的延长, 胡桃醌含量会逐年下降, 杂质峰逐渐增多, 特别是潮湿的环境对胡桃醌含量的稳定性影响较大。