有机党政多糖钙的提取及初步合成研究.docxVIP

有机党政多糖钙的提取及初步合成研究 党参是桔梗科多年生草质藤本植物的根。其味甘, 性平, 入脾、肺二经, 具有补中益气、生津和胃之功。据《本草正义》载:党参“健脾而不燥, 滋胃阴而不湿, 润肺而不犯寒凉, 养血而不偏滋腻”。党参多糖是党参中的有效成分之一, 其药理作用主要包括调节机体免疫、清除自由基和造血等, 其中尤以党参多糖的免疫调节作用研究的较多和深入, 应用价值广泛。因此党参多糖同其它药用植物多糖相似, 不仅具有重要的生物功能, 也具有良好的药用价值。 我国现有补钙剂药品以无机的碳酸钙为主, 但碳酸钙作为补钙剂和钙强化剂, 存在溶解度低、干扰无机离子吸收等诸多缺陷, 临床亟待更换。党参多糖是具有多方面生物活性的生物大分子, 能够与金属离子发生配合反应生成相应的复合物。本研究为了充分利用党参资源, 在不加热条件下, 提取具有免疫增强活性的党参多糖与钙络合反应生成党参多糖钙络合物, 该产物作为一种潜在的有机钙, 显示了良好的开发利用价值。 1 材料、试剂和机器 1.1 基准的市购分析纯 党参:购于黄河药材市场, 经我院专业老师杨林副教授鉴定为正品。基准CaCO3、Na2CO3、CaCl2、NaOH、EDTA-2Na、无水乙醇、95%乙醇、乙醚、石油醚、正丁醇、丙酮、氯仿、浓硫酸、HCl等均为市购分析纯。 1.2 仪器、试验设备 透析袋 (Thermo 7000MWCO USA) , 磁力加热搅拌器 (78-1, 江苏省金坛市医疗仪器厂) , 紫外分光光度计 (UV-920, 北京瑞丽分析仪器公司) , 离心机Anke (Tnl-5-A北京瑞丽分析仪器公司) , 旋转蒸发仪 (RE52-86A上海亚荣生化仪器厂) , 真空干燥箱 (DZF-6020型, 上海博迅实业有限公司医疗设备厂) , 电子天平 (AB104-N, Mettler Toledo Group) , 数显恒温水浴锅 (HH-5, 江苏省金坛市医疗仪器厂) 。 1.3 edta-2na的溶解 1 mol/L CaCl2:准确称取22.2g无水CaCl2于100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。0.02 mol/LEDTA:准确称取2.0 g固体EDTA-2Na溶解于少量水中, 加2 mol/L NaOH调pH至7.5~8, 溶解后定容于250 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度, 冷却, 摇匀。0.5%钙红指示剂:0.5 g钙红用95%乙醇定容于100 mL容量瓶中。 2 实验方法 2.1 提取多糖的制备 准确称取党参粗粉100g, 按1∶5的量加入石油醚脱脂, 75 ℃回流2h, 抽滤, 滤渣用1∶5的95%乙醇80 ℃回流2 h, 抽滤, 滤渣60 ℃烘干, 按脱脂后党参1∶10料液比加蒸馏水在95℃下回流2 h, 纱布过滤, 二次提取, 合并滤液, 浓缩至1 mg/mL, 按粗多糖液∶氯仿∶正丁醇=25∶5∶1比例加入Sevage试剂, 振荡10 min后静置12 h, 4 000 r/min离心5 min除去沉淀, 重复7到8次, 同时用紫外分光光度计, 考马斯亮蓝试剂测吸光度, 直到肉眼看不见蛋白层, 将剩余多糖液补充至100 mL, 用90%乙醇沉淀 (加无水乙醇900 mL) , 溶液中有大量乳白色沉淀生成, 4 ℃静置24 h, 次日过滤, 分别用20 mL无水乙醇、丙酮、乙醚各洗3次, 滤渣50 ℃真空干燥, 得党参多糖, 并用苯酚-硫酸法方法检测提取多糖的含量。 2.2 粗多糖钙络合物的制备 取2 g干燥的党参多糖溶解于100 mL蒸馏水中, 配制2 mol/L CaCl2溶液100 mL, 将配好的2 mol/L CaCl2溶液缓慢滴加入多糖溶液中, 同时滴入2 mol/LNaOH使pH保持在9~11之间, 边加边搅拌进行络合反应, 直到溶液饱和为止, 继续搅拌1 h, 生成党参多糖钙络合物。4000 r/min离心5 min除去沉淀, 向上清液中加入10 mL 2 mol/L Na2CO3溶液有大量白色沉淀产生, 离心直到无沉淀产生, 上清液装入透析袋透析24h除去游离钙, 向上述溶液中加入2倍体积的无水乙醇, 产生沉淀, 静置24 h离心得粗多糖钙络合物。沉淀分别用甲醇、丙酮、乙醚洗涤, 将沉淀干燥, 得多糖钙。 2.3 党参糖钙中葡萄糖的识别 取0.1%的多糖钙溶液0.5 mL, 再向其中加入苯酚0.6 mL、浓硫酸3.0 mL, 观察是否显多糖的特殊反应。 2.4 党参多钙配合钙的识别 2.4.1 样品的预处理 称取干燥恒质量的CaCO3基准物质0.16 g于小烧杯中, 加几滴蒸馏水润湿, 盖上表面皿, 从烧杯嘴用滴管缓慢加入1∶1 HCl 15 mL, 摇动使之完全溶解, 再加入蒸馏水, 将溶液煮沸5 min, 除去CO2;