黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌no的影响.docxVIP

黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌no的影响 微血管内皮细胞（mvecs）位于血液和组织液之间，具有各种功能，如物质运输、自分泌和旁分泌。这在身体的免疫反应和炎症反应中发挥着非常重要的作用。目前已经确认内皮细胞可分泌多种血管活性物质,主要可分为两大类:一类是内皮源性舒张因子(Endothelium-derived relaxing gactor,EDRF),主要包括NO(Nitric oxide,NO)、内皮衍生的超极化因子(EDHF)、前列环素(PGI2)等;另一类是内皮源性血管收缩因子(endothelium-derived vasoconstrictor factor,EDCF),主要有内皮素血管紧张素和血栓素等作为一种新型生物信息传递介质,直接参与炎症及组织细胞的损伤与增殖。NO与免疫细胞产生的细胞因子交互作用,可调节细胞/体液免疫(Th1/Th2)间的平衡并影响NO自身的产生,使机体的免疫调节处于恰当的水平。 黄芪多糖(Astragulus Polysacharin,APS)是黄芪中含量最多、免疫性较强的一类物质。黄芪多糖具有显著的免疫增强作用,能显著增强巨噬细胞的吞噬功能,刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞功能,增强自然杀伤细胞(NK)活性,并可诱导机体产生干扰素本试验通过研究黄芪多糖对肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响,为阐述黄芪多糖免疫增强作用机制提供试验依据。 1 材料和方法 1.1 仪器、试药和仪器 黄芪购自北京同仁堂;NO检测试剂盒购自深圳晶美生物工程公司(批号0401003)。720型紫外分光光度计(UNICO公司)、MCO-17AC型CO2恒温培养箱(日本三洋公司)、DMB5型倒置显微镜(厦门麦克奥迪公司)。黄芪多糖由本实验室按照水提醇沉法提取黄芪多糖,其含量测定用硫酸蒽酮法,浓度达80%。大鼠肠黏膜微血管内皮细胞由北京农学院免疫组化实验室提供。 1.2 测试方法 1.2.1 大肠粘膜微血管内皮细胞的培养和鉴定 复苏冻存细胞,待细胞铺成单层时采用间接免疫荧光法检测内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原(F-ⅧRAg),经鉴定确认为血管内皮细胞。 1.2.2 维持培养基的制备 选取经鉴定的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞于48孔培养板中培养,培养2~3 d后用细胞记数板记数,待细胞数量为1.0×105时吸弃各孔中原有培养基,然后加入含有下述药物的维持培养基0.5 mL。每组分别有5孔相同细胞(即n=5)。 A组:对照组。B组:不同浓度、不同时间段黄芪多糖对正常肠黏膜微血管内皮细胞分泌的影响,在细胞培养孔中分别添加以下浓度维持培养基。黄芪多糖-1(450μg/mL);黄芪多糖-2(900μg/mL)。 1.2.3 细胞离心、封装 各组细胞在培养1、3、6 h分别采集培养上清液经3 000 r/min离心10min,将细胞上清液无菌分装于离心管中,于-20℃条件保存。NO(NO)的测定(硝酸还原酶法),按照试剂盒说明操作,于530 nm处检测。 1.3 数据的统计处理 2 试验结果 2.1 细胞探索na和no量参数对小鼠细胞毒性的影响 由表1可知,各组细胞分泌NO的量1 h最高。黄芪多糖-2组细胞分泌NO量在1 h和3 h时极显著高于对照组(P0.01),在6 h显著高于对照组细胞(P0.05);黄芪多糖-1组细胞分泌NO量在1 h和6 h时显著高于对照组(P0.05),在3h与对照组差异不显著(P0.05)。可见黄芪多糖可以维持血管内皮细胞分泌NO的量,能适当改善血管壁的通透性。 2.2 减少量的量是测定一个 由图1可知:三个时间段中1 h时细胞分泌NO的量最多,随着时间的推移各组细胞分泌NO的量逐渐减少。在每个时间段中对照组细胞分泌NO的量最小,黄芪多糖作用于肠黏膜微血管内皮细胞引起细胞分泌NO的量随着黄芪多糖的浓度呈剂量依赖性,黄芪多糖(900μg/mL)组高于黄芪多糖(450μg/mL)组,即黄芪多糖浓度升高,内皮细胞分泌NO的量也升高。 3 no对机体非特异性免疫功能的影响及对aps免疫增强作用机制的探讨 蒋德菊等研究发现,黄芪、当归、丹参、川芍等益气活血的中草药组成的健胎液使人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌的ET明显下降,而前列环素、NO的量显著升高,起到保护VECs的生物活性功能。但黄芪多糖对肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响还未见报道,本试验应用黄芪多糖作用于大鼠肠黏膜微血管内皮细胞,结果引起NO分泌增加,而且呈剂量依赖性,这与蒋德菊报道结果一致。 NO是一种生物信息传递体,能维持体内微循环内环境恒定和保护机体非特异性免疫功能。在神经信息的传递、血管调节以及免疫功能的调节等方面具有重要的生物学功能。健全的血管内皮细胞是维持血管张力的基础,基础状态下血管阻力由NO控制。 NO通过与各种细胞因子间错综复杂的相互作用,