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慢性胃炎患者锈苔形成过程中苔性化学成分的变化 舌象是中医的一个重要方面。舌象可以反映人体生命运动过程中产生的生理和病理信息。通过舌头和舌头的变化，我们可以了解疾病的发生、辨证论治和治疗效果。中医历来重视舌苔在辨证中的作用,无论八纲辨证、脏腑辨证还是气血精津辨证,舌苔都是辨证中不可或缺的体征。临床实践表明,在慢性胃炎病程中,舌体的变化较慢,舌苔的变化快而明显,是判断病情轻重、进退的一个敏感指标。 近年来,关于舌苔客观化的研究很多,目前国内外主要采用细胞生物化学、免疫学、分子生物学、蛋白组学等方法和技术,但有关舌苔代谢组学研究鲜见报道。本文利用代谢组学技术检测慢性胃炎腻苔、非腻苔和正常人正常舌苔的舌苔液的代谢物谱,寻找与腻苔相关的代谢特征成分,确定“腻苔相关代谢谱群”,旨在探讨腻苔生成过程中机体内的代谢物的变化。 1 数据和方法 1.1 研究主题 1.1.1 慢性私家车患者正常嘴唇检测 病理舌苔组为2009年2月～2010年12月在上海中医药大学附属龙华医院胃镜室进行胃镜检查并最后确诊为慢性胃炎的患者,正常舌苔对照组来源于上海中医药大学在校师生和健康老年人(经常规体检报告结合填写的健康人调查表显示没有任何疾病者)。 1.1.2 诊断标准 西医诊断参照2000年中华医学会消化病学分会全国慢性胃炎研讨会意见中关于慢性胃炎的诊断。 1.1.3 输入条件 1.1.3. 1参考标准 (1)符合慢性胃炎诊断标准;(2)调查当天经胃镜检查证实诊断;(2)受调查者年龄20～75岁。 1.1.3. 因素,即为登记事者或不同性别者 (1)患有十二指肠溃疡、胃溃疡、胃出血、胃癌及肠道疾病的患者;(2)合并肝、心、肾、肺、脑等脏器疾病者或精神病患者;(3)孕妇或哺乳期妇女;(4)过敏体质或对多种药物过敏的患者。 1.1.4 标准的删除 近期1个月内服用过抗生素者。 1.1.5 舌象的测定 参照《中医诊断学》舌苔分类标准观察舌苔。于上海中医药大学附属龙华医院胃镜室进行样本采集,由两名有丰富中医临床经验的医生盲态观察舌象,填写舌象信息判读量表;同时采用上海中医药大学和上海亚太计算机有限公司共同研制的Z-BOX舌象数字化分析仪自动检测舌象。最后选用临床医生判读和舌象数字化分析仪报告舌苔一致的患者。 根据试验设计分3组,分别为慢性胃炎腻苔组40例(薄白腻苔10例、薄黄腻苔10例、黄厚腻苔 10例、白厚腻苔10例)、慢性胃炎非腻苔组30例(薄白苔10例、薄黄苔10例、光剥苔10例)和正常组(舌质淡红、舌苔薄白而润)20例。 1.2 材料和方法的检测 1.2.1 仪器、色谱和色谱柱 乙腈(色谱纯,美国Tedia公司),乙酸铵、冰乙醇(色谱纯,加拿大Fisher公司),超低温冰箱 (MDF-U53V,日本三洋公司),高速冷冻离心机(Avanti J-30,美国贝尔曼库尔特香港公司),超声破碎仪(SONICS750,美国Labconco公司),冷冻干燥机(FreeZone 12升立式冻干机,美国Labconco公司),超高效液相色谱系统(ZQ2000,美国Waters公司),色谱柱(HSS T3色谱柱,2.1 mm×100 mm、1.7 μm,美国Waters公司)。 1.2.2 方法的检测限 嘱患者用生理盐水漱口,采用消毒的小钥匙刮取舌苔,置入装有2 mL生理盐水的消毒灭菌的EP管中,置于冰盒内,-80 ℃低温冰箱保存备用。 每个舌苔样本于室温放置1～2 h后,在4 ℃下以3 000 r/min离心10 min,计数细胞,每个舌苔液样本中约含1×106个/mL细胞,取上清,保存于-80 ℃。分析时,取150 μL上清液,加入150 μL乙腈,振荡约 30 s,静止5 min;于12 000 r/min转速(最大相对离心力 19 830×g)下离心3 min,取上清液,置冷冻浓缩仪中冻干。冻干后的固体复融于150 μL 80%乙腈溶液中。 检测前,将制备好的待测样本稀释100倍。将制备好的样本用微孔滤膜(0.45 μm)过滤后,用高效液相色谱质谱联用仪(ultra-performance liquid chromatography and mass spectrometry, UPLC-MS)检测。每个样品自动进样2次,结果取平均值。 1.2.3 样品采集条件 色谱条件:色谱柱为Waters HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7 μm),流动相A为5 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸),流动相B为乙腈。洗脱梯度:0～1 min,98% A;1～3 min,98%～50% A;3～12 min,50%～40% A;12～16 min,40%～10% A;16～20 min,10%～98% A。流速为600 μL/min;柱温为45℃。每个样本