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中国对虾卵黄膜形成过程的研究 许多没有脊椎动物和动物的成熟卵外有一层或多层膜。如果成熟卵在土层反应，卵的被膜和受影响的膜共同形成繁殖膜，以保护胚胎的发育。 有关孵化膜的形成和构成, 在不同动物中, 变化各异。许多动物成熟卵子外面有一层或多层凝胶膜 (jelly coat) , 其中在海胆类和两栖类动物研究得较为详细, 凝胶膜为孵化膜的组成部分, 有诱导顶体反应和保护作用。有关该方面在十足目甲壳动物研究报道较少, 国外对普通滨蟹 (Carcinus meanas)、锐脊单肢虾 (Sicyonia ingentis)、褐对虾 (Penaeus aztecus)的凝胶膜或孵化膜进行过研究; 国内曾对中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis)、日本沼虾 (Macrobrachium nipponense)进行过初步研究, 作者在研究中国对虾受精过程中, 对孵化膜的形成进行了光镜和电镜观察, 旨在丰富中国对虾发育生物学内容, 并为十足目经济甲壳动物科学化人工育苗提供基础资料。 1 材料和方法 于1997年4～6月份从黄骅中捷友谊农场对虾育苗站取样。 1.1 选择亲水虾 从产卵池 (亲虾池) 挑选出体格健壮、性腺发育到4、5期, 卵巢充满头胸部和腹部背面, 灰绿色, 每次2、3尾。 1.2 海水预处理 挑选好的越冬虾或自然海虾放于50dm3塑料桶中, 水位30～40cm, 海水用200目筛绢过滤, 盐度约30, pH约8.0, 温度约16℃, 连续充气。将塑料桶放于稍暗处或用黑塑料布遮盖进行诱导产卵。 1.3 海水淡化后培养材料的观察 1.3.1 待亲虾产卵时将其取出, 让其直接产卵于盛满海水的烧杯中, 以约30～40s间隔取样处理。 1.3.2 待亲虾产卵时迅速取出, 并把腹甲连同纳精器剪去, 将成熟卵子轻轻挤入盛有海水的烧杯中, 间隔一定的时间取样处理。 用光学显微镜观察的材料于波恩氏液固定, 直接于Olympus BH-2显微镜观察拍照;切片材料酒精系列脱水, 石蜡包埋, 切片厚6～8μm, H.E.染色, Olympus BH-2显微镜观察拍照;电子显微镜观察的材料于2.5%戊二醛和1%锇酸双重固定, 酒精系列脱水, 入丙酮、醋酸异戊酯, LG-1A型临界点干燥仪干燥, KYKY-1000B扫描电子显微镜观察拍照。 2 结果 2.1 成熟卵母细胞的皮质棒 中国对虾成熟卵卵圆形或椭圆形, 直径约200μm, 表面为一层卵黄膜 (vitelline envelope) , 厚约0.5μm (图版Ⅰ-1) , 质膜位于卵黄膜之下并以约0.7μm的间隔凹入, 形成若干小囊称质膜凹 (plasmolemma crypt) , 所以从表面上看, 成熟卵的表面有许多小凹分布, 每个小凹的直径约1.8μm (图版Ⅰ-2) 。在质膜凹内, 分布有在卵子发生过程中由卵母细胞产生的皮质棒 (cortical rod or cortical specilization) 。每一小凹内有一个皮质棒, 皮质棒在成熟卵母细胞中为长椭圆形或棒状 (图版Ⅰ-3) 。 当成熟的卵母细胞由雌虾生殖孔排入海水中, 与海水一接触时, 皮质棒便从质膜凹中膨胀出来, 并不断地向外突出 (图版Ⅰ-4) ;取出成熟未受精卵子放入海水中, 也可引起皮质棒从质膜凹中膨胀出来, 说明中国对虾成熟卵子的皮质棒的排出是由于其与海水接触引起的。皮质棒上举的同时, 质膜凹逐渐变浅, 质膜逐渐变平滑 (图版Ⅰ-5) , 在水温16℃条件下 (以下水温相同) , 质膜变平滑约需2min。由于质膜变平滑, 卵母细胞直径也逐渐增大。皮质棒由质膜凹排出后, 上端较粗, 顶端较平坦, 向下渐细 (图版Ⅰ-6) 。随着皮质棒向外举起, 也将卵黄膜举起 (图版Ⅰ-7) 。皮质棒在举起的过程中, 质膜凹内一些无定形物质由溶胶状态逐渐凝胶化 (图版Ⅰ-8) , 在质膜外形成一层凝胶层, 覆盖于卵母细胞表面。 皮质棒溶解速度很快, 从皮质棒举起至皮质棒由基部开始溶解扩散不到1min的时间, 溶解的结果使皮质棒基部变得疏松, 直径变粗, 这种溶解扩散作用从皮质棒的基部逐渐向上 (图版Ⅰ-9、10) , 这样皮质棒由原来的“棒锤状”逐渐变为“柱状”。由于其不断溶解扩散, 并连成一体, 逐渐失去其本身形态, 并融合成为疏松的网状结构称为凝胶膜 (图版Ⅰ-9) 。外面由卵黄膜和皮质棒顶端物质融合, 内表面由质膜凹内无定型物质形成的凝胶层与皮质棒基部融合而成。 2.2 孵化膜的形成 成熟的卵母细胞进入海水后被激活, 停滞在第一次成熟分裂中期的分裂相重新启动, 进行成熟分裂, 精子在凝胶膜形成后, 第一极体排出前入卵。排出第一极体后, 受精膜举起, 并和其外面的凝胶膜融合 (图版Ⅰ-11) 。 这样由卵黄膜、凝胶膜