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hivaids病人血清核酸检测的临床应用 《国家艾滋病检测技术规范》（2009年修订版）自出版以来，对全国各地的疫情、疫情、疗效观察和预后评估提供了全面、规范的指导。HIV/AIDS病人诊断主要以检测HIV抗体为主, HIV核酸检测为辅的策略。但在实施过程中存在不确定结果的样本待确证时间长、随访时间间隔长 (HIV抗体结果不确定的对象随访周期为4周) 的问题, 易导致病例在待确证环节流失, 不利于HIV/AIDS病例的管理。有数据显示, HIV抗体不确定者在随访过程中, 约1/3可能发生抗体阳转, 对大部分未发生阳转人群的随访将耗费大量人力和物力。以上存在的问题均不利于HIV/AIDS病人的早期干预和治疗, 因此, 早期、快速、高效的HIV诊断是急需解决的问题。为此, 云南省德宏州疾病预防控制中心探索将核酸检测引入蛋白免疫印迹试验 (Western blotting, WB) 不确定结果的研究, 以期为HIV高发地区制定HIV早期诊断策略提供新思路。 1 材料和方法 1.1 hiv/aids病人wb确证试验结果 2009年10月至2013年10月, 云南省德宏州疾病预防控制中心进行WB确证试验共3429例HIV/AIDS病人, 其中WB不确定结果152例。不确定结果中, 流行病学及实验室资料齐全、初次血浆留样1000μL的样本49例。 1.2 方法 1.2.1 hiv抗体的筛选 对纳入研究样本的HIV抗体检测及流行病学资料进行回顾性分析, 所有样本进行核酸检测。HIV抗体检测针对研究对象的来源不同, 分别采用HIV抗体的常规检测策略和高危人群艾滋病自愿咨询检测 (Voluntary Counseling and Testing, VCT) 替代策略, 进行HIV抗体初筛及确证试验。确证采用WB试验, 对WB结果不确定者进行随访。所有样本进行核酸检测 (Viral load test, VL) 。所有实验操作严格按照《全国艾滋病检测技术规范 (2009年修订版) 》执行。 1.2.2 hiv抗体确认试验 HIV抗体筛查实验采用美国Abbot快速初筛试剂、北京华大吉比爱有限公司和法国生物梅里埃酶联免疫吸附试验 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 试剂盒;HIV抗体确认试验采用HIV Blot 2.2试剂盒 (新加坡MP生物医学亚太私人有限公司) ;核酸检测试剂采用Nuclisens EasyQ HIV-1, V2.0试剂盒 (法国Biomerieux公司) , 在Nucliaens EasyQ分析仪上检测。 1.2.3 hiv抗体阳性和阴性诊断 判断标准2条env带 (gp160/gp41和120) 及gag (p17、p24、p55) 或pol (p31、p51、p66) 判定为HIV抗体阳性;无HIV抗体特异带出现, 判定为HIV抗体阴性;出现HIV抗体特异带, 但不足以判定阳性, 则判定为HIV抗体不确定, p24gp160带型判为不确定。 1.2.4 hiv感染诊断 病毒载量 (Viral load, VL) 5000拷贝/mL判定为HIV感染;VL值20拷贝/mL (最低检测限) 者判定未感染HIV。 2 hiv检测咨询情况 49例样本中, 强制劳教戒毒人员和VCT门诊人员各12例 (占24.5%) , 产检4例 (占8.2%) , 医务人员主动提供HIV检测咨询 (Provider-initiated HIV testing and counseling, PITC) 门诊人员3例 (占6.1%) , 感染者配偶及性伴和婚检各2例 (占4.1%) , 男男性行为者、新兵体检、娱乐场所人员及专题调查各1例 (占2.0%) (共计4例) , 其他10例 (占20.4%) 。 2.1 hiv抗体阳性检测 49例中, 有22例检出HIV核酸。其中成功随访18例, 随访过程中17例HIV抗体阳转, 1例带型有进展但不满足诊断标准。被访者WB条带在2周随访时均出现明显变化。核酸阴性的27例, 7例成功随访, WB条带无进展或阴性。 2.2 v抗体阳转 22例核酸阳性者中, 初次核酸检测值最低为380拷贝/mL, 最高为16 000 000拷贝/mL。成功随访的18例中, HIV抗体阳转的17例, 其中性传播10例 (58.8%) (包括9例异性性传播和1例男男性传播) , 注射毒品传播4例 (23.5%) , 传播途径不详3例 (17.6%) 。18例WB带型主要为p24gp160占77.8% (14/18) 、gp160占16.7% (3/18) 。两次采血时间间隔、WB结果带型及两次ELISA (梅里埃) 结果 (S/CO值) 的比值见表1。 2.3 成功随访7例,2例未检出