酶联免疫吸附实验-ELISA---操作规则(新手适用).docVIP

(完整word版)酶联免疫吸附实验 ELISA --操作规则(新手适用) (完整word版)酶联免疫吸附实验 ELISA --操作规则(新手适用) PAGE PAGE 30 (完整word版)酶联免疫吸附实验 ELISA --操作规则(新手适用) 酶联免疫吸附实验 ELISA －－操作规则（新手适用） 一、实验目的 酶联免疫吸附测定（enzyme—linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，ELISA过程包括抗原（抗体)吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体(抗原)，再加相应酶标记抗体(抗原），生成抗原(抗体）-—待测抗体(抗原)—-酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原)的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比. 二、实验原理 用于免疫酶技术的酶有很多,如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶,葡萄糖氧化酶,碳酸酐酶,乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等.常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶,碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量. 辣根过氧化物酶（HRP)是一种糖蛋白，每个分子