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氨基脲敏感胺氧化酶的研究进展 氨基乙酰胺防止酶（ssa）对脂质细胞中的含量非常高。 SSAO的底物结合低浓度的钒酸盐后可以有效的激活脂肪细胞内葡萄糖的转运, GLUT4转运体易位到细胞膜并使甘油三酯积聚。该机制依赖于SSAO的活性的增加及过氧化氢在细胞内的生成。上述过程可被SSAO抑制剂氨基脲抑制, 而对MAO抑制剂没有反应。氨基脲抑制胺氧化酶在调节脂肪细胞稳态方面具有重要作用, 研究SSAO抑制剂氨基脲在3T3-L1中的影响对于预防心血管疾病的产生及临床治疗具有非常重要的作用。 1 脂肪细胞ssoa的结构 SSAO是一种结合铜离子的单胺氧化酶, 由AOC-3基因编码, 催化外源性和内源性单胺化合物氧化脱氨生成相应的醛, 过氧化氢和氨［1］。在SSAO蛋白结构中有一个具有反应活性的羰基辅基, 这个辅基可能是吡哆醛磷酸, 吡咯并喹啉或6- 羟基多巴。从而使该酶对羰基试剂敏感, 可以被氨基脲, 氨基胍, 酰肼等氧化剂抑制。SSAO酶对单胺氧化酶 (MAO-A或MAO-B) 的抑制剂和炔类化合物如氯吉灵、帕吉林、司立吉林等则具有拮抗作用［2］。 SSAO广泛分布于哺乳动物组织, 其在脂肪细胞、平滑肌细胞和内皮细胞中的表达则尤其高, 在内皮细胞中其也被称为血管粘附蛋白-1 (SSAO/ VAP-1)［3］。SSAO包括血浆SSAO和组织SSAO, 血浆SSAO是可溶的, 而组织SSAO在N端具有跨膜结构域, 表现出膜结合性质, 膜结合型的SSAO由金属蛋白酶水解释放出具有活性的蛋白, 能够代谢胞外胺［4］。目前SSAO多种动物包括人的SSAO已被克隆, 对小鼠3T3脂肪细胞系中的SSAO进行克隆并对其测序, 结果发现, 小鼠类SSAO与大鼠膜结合型胺氧化酶共有VP97, 与人类胎盘胺氧化酶 (胞内部分) 共有5个氨基酸残基和疏水跨膜区, 跨膜区将SSAO锚定于质膜上, 与牛血清胺氧化酶和人肾胺氧化酶相比, 小鼠SSAO检测水平较低, 尤其是N端部分, 这种不同可能由于牛血浆胺氧化酶和二胺氧化酶是分泌型酶而SSAO为膜结合型而致［5］。 SSAO可以氧化芳香族和脂肪族的伯胺, 甲胺和N- 乙酰吡啶都是其生理性底物, 能够被SSAO所氧化分解。尽管苄胺并非其生理性底物, 但作用效果却非常好。脂肪细胞SSAO底物特异性范围并非很窄, 因为组胺和酪胺同样可以被SSAO降解。甲胺和氨基酮为中间代谢过程产物, 作为假定的SSAO内源性底物, 目前SSAO内源性底物的性质至今仍在研究中。SSAO为多功能膜结合蛋白, 除了代谢单胺化合物还具有血管粘附性质［6］。3T3-L1前脂肪细胞系成熟过程中, SSAO促进葡萄糖转运和脂肪转化, 而其表达于某些类型细胞的粘附性质, 仍有待于进一步研究。 23 glut4转运体ssoa SSAO表达于多种组织, 但在脂肪组织表达量非常高。据报道, 大鼠脂肪组织细胞所表达SSAO (m RNA和活性) 是其他组织细胞表达的5~50倍［7］。 有人提出血液中可溶性SSAO/VAP-1主要来源于脂肪组织表达的SSAO［4］。已有研究通过比较未分化与分化的小鼠3T3脂肪细胞RNA差异表达, 证实SSAO在脂肪转化过程中急剧增加。大鼠脂肪细胞中SSAO主要表达于细胞膜上, 3T3-L1脂肪细胞的亚细胞分级分离证实SSAO蛋白在质膜上的分布量远大于其在小的微粒体上的分布量。这表明脂肪细胞SSAO可能代谢胞外胺。另外, SSAO在脂肪细胞中的分布似乎不受激素的影响, 3T3-L1脂肪细胞孵化于胰岛素中, 其在胞内膜上的含量不受影响［8］。 SSAO除了存在于脂肪细胞的细胞膜, 也存在于GLUT4转运体囊泡中。根据纯化的小鼠3T3-L1脂肪细胞和分离的大鼠脂肪细胞, 我们发现部分的SSAO存在于GLUT4转运体囊泡, 大约为胞内SSAO总量的18%~24%。此外, 对SSAO与GLUT4共存囊泡的免疫耐受实验发现只有使用最大剂量的抗GLTU4抗体才能检测到这种共存体, 表明仅GLUT4囊泡的亚型, 可能存在于内体的隔离区［8］。 3 脂肪细胞脂结合蛋白的表达 3T3-L1前脂肪细胞中, 几乎检测不到SSAO的m RNA, 而在脂肪转化诱导过程中, m RNA诱导表达量增加大约100-500倍, 3T3-L1前脂肪细胞分化过程中, 其丰度急剧增加表达［5］。脂肪细胞脂结合蛋白m RNA和甘油-3- 磷酸脱氢酶m RNA是脂肪转化过程中具有特征的标记分子［9］, 对三者进行比较, 发现SSAO的m RNA诱导作用发生于脂肪细胞脂结合蛋白转录本出现之后, 与甘油-3- 磷酸脱氢酶转录本是伴行的, 因此, SSAO转录本表达代表脂肪合成的晚期事件, SSAO已被列为3T3系脂肪细胞分化的一个晚期标记分子。3T3-L1脂肪细胞中胺氧化酶家