真核生物三种RNA聚合酶的特点.docVIP

1．简述真核生物三种RNA聚合酶的特点？

酶

细胞内定位

转录产物

相对活性

对鹅膏蕈碱的敏感程度

RNA聚合酶Ⅰ

核仁

rRNA

50%--70%

不敏感

RNA聚合酶Ⅱ

核质

hnRNA

20%--40%

敏感

RNA聚合酶Ⅲ

核质

tRNA

约10%

存在物种特异性

?

?

?

?

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下边是详细的

RNA聚合酶Ⅰ的转录产物是45SrRNA，经剪接修饰后生成除5SrRNA外的各种rRNA。rRNA与蛋白质组成的核糖体是蛋白质合成的场所。

RNA聚合酶Ⅱ在核内转录生成hnRNA，经剪接加工后生成的mRNA被运送到胞质中作为蛋白质合成的模板。

RNA聚合酶Ⅲ的转录产物是tRNA，5SrRNA,snRNA，其中snRNA参与RNA的剪接。

2．简述乳糖操纵子的调控原理？

答：答：（1）乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O,一个启动子P和一个调节基因I.

（2）阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。

（3）CAP的正调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡糖糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。

（4）协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制，互相协调、互相制约。

3．简述DNA聚合酶和DNA连接酶在DNA复制中的作用？

答：DNA聚合酶（DNApolymerase）是细胞复制DNA的重要作用酶。

DNA聚合酶,以DNA为复制模板，从将DNA由5端点开始复制到3端的酶。

DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。

真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶α（定位于胞核，参与复制引发具5－3外切酶活性），β（定位于核内，参与修复，具5－3外切酶活性），γ（定位于线粒体，参与线粒体复制具5－3和3－5外切活性），δ（定位核，参与复制，具有3－5和5－3外切活性），ε（定位于核，参与损伤修复，具有3－5和5－3外切活性）。

原核细胞有3种DNA聚合酶，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶I是单链多肽，可催化单链或双链DNA的延长；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5-PO4与另一DNA链的3-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子，和DNA聚合酶Ⅰ的分子数相近，这也是比较合理的现象。因为DNA连接酶的主要功能就是在DNA聚合酶Ⅰ催化聚合，填满双链DNA上的单链间隙后封闭DNA双链上的缺口。这在DNA复制、修复和重组中起着重要的作用，连接酶有缺陷的突变株不能进行DNA复制、修复和重组。

4．简述真核生物基因时空表达的意义？

答：所有生物的基因表达都具有严格的规律性，即表现为时间特异性和空间特异性。

基因表达的时间特异性是指某一特定基因的表达按一定的时间顺序发生。如编码甲胎蛋白的基因在胎儿肝细胞中活跃表达，因此合成大量的甲胎蛋白。在成年后该基因的表达水平很低，几乎检测不到ATP。但是，当肝细胞发生转化形成肝癌细胞时，编码ATP的基因又重新被激活，大量的AFP被合成。

空间特异性是指多细胞生物个体在某一特定生长发育阶段，同一基因在不同的组织器官表达不同。在多细胞生物个体某一发育、生长阶段，同一基因产物在不同的组织器官表达水平是不一样的。在个体生长、发育过程中，一种基因产物在个体的不同组织或器官表达，即在个体的不同空间出现，这就是基因表达的空间特异性。

5．已知一个编码蛋白质的cDNA序列，如何才能得到相应的蛋白质？

1、从基因文库或cDNA文库中分离目的基因或通过pcr扩增得到目的基因；2、体外构建重组DNA分子，选择合适的克隆载体如PBV220，用限制型内切酶