核酸的分子结构与功能《湘雅医学院》.pptVIP

二、DNA的变性1.定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。2.DNA变性的本质：是双链间氢键的断裂，不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变。1.定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。本文档共132页；当前第94页；编辑于星期六\7点10分加热过量酸，碱。变性试剂如尿素、酰胺。有机溶剂如乙醇、丙酮等。3、因素：4.变性后其它理化性质变化：OD260增高；粘度下降；生物活性改变本文档共132页；当前第95页；编辑于星期六\7点10分DNA的紫外吸收光谱增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。本文档共132页；当前第96页；编辑于星期六\7点10分解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。本文档共132页；当前第97页；编辑于星期六\7点10分加热DNA溶液，使其对260nm紫外光的吸收度突然增加，达到其最大值一半时的温度，就是DNA的变性温度（融解温度，Tm）。DNA的变性温度本文档共132页；当前第98页；编辑于星期六\7点10分Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关，G+C的含量越高，则Tm越高。本文档共132页；当前第99页；编辑于星期六\7点10分三、DNA的复性与分子杂交复性、退火复性（renature）：变性DNA在适当条件下，两条互补链又重新恢复天然的双螺旋构象。退火(annealing)：热变性的DNA经缓慢冷却后的复性。复性条件：比Tm低25℃的温度。本文档共132页；当前第100页；编辑于星期六\7点10分在格里菲斯的实验中，单独注射加热杀死的S型细菌，小鼠不死亡，而将其与活的R型细菌混合后注射则小鼠死亡。于是格里菲斯由此得出结论：被加热杀死的S型细菌中含有某种能将无毒性的R型细菌转化成有毒性的S型活细菌的活性物质（后来证实该活性物质是DNA）。

那么，我们不禁要问，既然S型细菌已经被加热杀死，为什么还会含有“活性物质”？本文档共132页；当前第101页；编辑于星期六\7点10分这是由于65℃加热处理使S型细菌的蛋白质外壳因变性而丧失生物活性，温度降低也不能恢复，即蛋白质的“毒素”功能也同时丧失。因此，单独注射被杀死的S型细菌对小鼠没有毒性，因而小鼠也就不会死亡。

而65℃温度，核酸只是氢键断开，双螺旋解体，当温度逐渐降低时，在碱基互补的作用下，分离的核酸单链会重新聚合，双螺旋结构得以恢复，核酸复性，即生物学活性依在。

也就是说，65℃加热处理仅仅使蛋白质变性，而DNA仍然保持生物活性。

本文档共132页；当前第102页；编辑于星期六\7点10分核酸的杂交本文档共132页；当前第103页；编辑于星期六\7点10分DNA-DNA杂交双链分子变性复性不同来源的DNA分子本文档共132页；当前第104页；编辑于星期六\7点10分核酸分子杂交的应用研究DNA分子中某一种基因的位置：两种核酸分子间的序列相似性：核酸分子杂交应用于物种之间亲缘关系的鉴定。检测某些专一序列在待检样品中存在与否基因诊断、疾病诊断是基因芯片技术的基础本文档共132页；当前第105页；编辑于星期六\7点10分本文档共132页；当前第106页；编辑于星期六\7点10分在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记。带有一定标记的已知顺序的核酸片段称为探针（probe）。本文档共132页；当前第107页；编辑于星期六\7点10分本文档共132页；当前第108页；编辑于星期六\7点10分本文档共132页；当前第109页；编辑于星期六\7点10分本文档共132页；当前第110页；编辑于星期六\7点10分第五节核酸酶(nucleases)核酸酶是指所有可以水解核酸的酶本文档共132页；当前第111页；编辑于星期六\7点10分一、种类1、根据底物分类DNase、RNase；单链核酸酶、双链核酸酶、杂合双链核酸酶2、根据催化部位分类：外切核酸酶和内切核酸酶外切酶：5′端→3′端或3′端→5′端核酸外切酶。内切酶：限制性核酸内切酶和非限制性核酸内切酶。限制性核酸内切酶(restrictionendonucleases)：能够识别DNA分子的特定核苷酸序列，并在识别位点或其周围断开DNA双链的一类核酸酶本文档共132页；当前第112页；编辑于星期六\7点10分参与DNA的合