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人参皂苷对免疫学影响的研究进展

1微波、香草醛、微波

53wv/vis紫外分光光度计（上海广学仪器厂）；hhw19.cu6g恒温水浴（上海七厂）；pd900g微波（顺德格兰斯微波设备有限公司）；人参原材（湖北省樊湘中医药公司提供，主要厂：吉林）；孙r对照品（中国药品生物制品鉴定研究所，批号110754-20018）；香草醛（浙江省温州东昌化工试剂厂，批号920101）；其他试剂是纯分析性的。

2方法和结果

2.1空白对照溶液的制备

2.2人参素提取的优化

由验证实验结果与正交实验所得结果比较,两者在同水平下其结果相近,故说明正交实验所确定的最佳提取工艺条件可行。

3标准曲线的建立

微波提取人参皂苷是利用其穿透人参细胞组织内部使之吸收微波能量,并转化为热能,段时间内内部分子极化迅速升温,达到提取效果。但在提取过程中,因乙醇沸点较低,加之人参皂苷具有表面活性作用,在加热时易产生大量泡沫。故应控制好加热温度和时间,避免浸提溶媒沸腾逸出和有效成分随乙醇蒸气带出,从而影响人参皂苷的得率。所以应选择微波低火力作为热源。

该方法较回流法省时省力,提取率高,常规回流法提取人参皂苷得率为3.27%,而按回流工艺提取可得率为8%左右。因此,微波提取人参中人参皂苷可在质检及医院制剂生产中推广采用。

2.1.1空白对照溶液的制备精密量取16%香草醛醇溶液(取16g香草醛溶于100ml乙醇溶液中)0.5ml和5ml77%硫酸溶液,于刻度试管中,加0.5ml甲醇溶液,混匀即得空白对照溶液。

2.1.2标准溶液的制备精密称取105℃干燥2h的人参皂苷Re对照品3.1mg,用甲醇定溶于10ml容量瓶中,使浓度为0.31mg/ml备用。

2.1.3标准曲线的建立精密吸取标准对照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml分别置于10ml刻度试管中,将试管置于冰水浴中,分别加入0.4,0.3,0.2,0.1,10ml甲醇,再加入0.5ml香草醛醇溶液(16%乙醇液)和5ml77%硫酸溶液,摇匀混合液置60℃恒温水浴箱中10min,立即在冰水浴中冷却15min,并在另一刻度试管中精密加入空白对照溶液6ml,作空白对照。在544nm波长处测定吸收度,绘制标准曲线,经线性回归,得人参皂苷Re对照品。浓度Y(mg/ml)与吸收度X之间的回归方程Y=0.031215X+0.000616,r=0.9929。表明人参皂苷Re在0.005166~0.02583mg/ml浓度范围内与吸收度X呈良好线性关系。

2.1.4供试品的制备实验提取的人参乙醇提取液,回收乙醇后,静置24h后,滤过,浓缩至浸膏,用10倍量注射用水溶解,洗涤容器2~3次,合并到分液漏斗中,加入乙醚萃取3次(20,10,5ml),弃去乙醚层,水层加入用水饱和的正丁醇溶液萃取4次(30,20,15,10ml),合并正丁醇液,减压回收正丁醇后,加入1/2量的注射用水,加热浓缩至干,残渣用甲醇溶解,移至100ml容量瓶中,加甲醇定容,摇匀后做供试品溶液备用。

2.1.5人参皂苷含量测定精密吸取供试品溶液(10,5,5,5,5,10,5,10,10ml)分别置于50ml容量瓶中,加甲醇至容量瓶摇匀。精密量取上述溶液0.2,0.2,0.2,0.3,0.2,0.2,0.3,0.2,0.2ml于刻度试管中,分别加入甲醇0.3,0.3,0.3,0.2,0.3,0.3,0.2,0.3,0.3ml。按“2.1.3”方法,在544nm处测得吸收度X,将X值分别代入线性回归方程中计算人参皂苷含量。