蛋白质组学题.docxVIP

破译人类全部遗传信息。与曼哈顿原子弹计划和阿波罗计划并称为三大科学计划。

1功能基因组学的主要研究内容

.基因功能的研究：

生物化学功能，如作为蛋白质激酶对特异蛋白质进行磷酸化修饰；细胞学功能，如参与细胞间和细胞内信号传递途径；发育上功能，如参与形态建成等。

采用的手段包括经典的减法杂交，差示筛选，cDNA代表差异分析以及mRNA差异显示等，但这些技术不能对基因进行全面系统的分析。新的技术应运而生，包括：基因表达的系统分析

.基因组的表达及时空调控功能的研究

.基因组多样性的研究

5功能基因组学研究中常用的新方法

.转基因和基因剔除

,基因诱变及突变体的PCR筛选

,表达谱基因芯片

.RNA干扰

.基因表达的系列分析(SAGE)

.蛋白质组学

.生物信息学

2条件性基因剔除

是指某一特定细胞类型或细胞发育的特定阶段剔除某一特定基因的技术。目前多采用Cre-loxP重组系统(Cre-loxP-mediatedgenereplacement,Cre-loxPrecombinationsystem)。其中Cre重组酶来源于侵染大肠杆菌P1噬菌体。分子量38000，无论在大肠杆菌体内或体外，它都能启动DNA分子间或分子内的联合与重组，重组发生在一个被称为loxP的特异位点(loxpsite)，且不需要其他的蛋白质因子。

DNA上的遗传信息先转录成mRNA，在rRNA和tRNA的参与下，将信息再翻译成蛋白质。这就是遗传学中的“中心法则”。

4是指对蛋白质间、蛋白质与DNA/RNA间的相互作用的研究。以细胞内与某个功能有关的或某种跳进下的一群蛋白质为主要研究内容，由此建立细胞内外信号传递的复杂网落。

21蛋白质组与基因组相比自身的特点

是什么？

多变与稳定；

无限与有限；

三维信息与一维信息；

研究对象分别为生物整体和生物组成元件，例如DNA；

蛋白质组学研究部不同于传统蛋白质的研究，重在与生命活动相关的动力学、细胞通路中的蛋白质复合物等；

蛋白质的结构还是由基因来决定的。因此蛋白质组的研究与基因组的研究存在着相辅相成的关系。

、5目前，蛋白质组学的主要研究

方法

X-ray衍射技术

二维电泳3,质谱

7蛋白质组研究中的样品制备通常可采用细胞或组织中的全蛋白质组分进行蛋白质组分析。也可以进行样品预分级，即采用各种方法将细胞或组织中的全体蛋白质分成几部分，分别进行蛋白质组研究。第一节蛋白质样品制备的基本方法

22蛋白质样品的制备的基本方法有那几个步骤

一、 细胞的破碎裂解

二、 制备蛋白质样品常用的缓冲液

三、 离液剂、还原剂、表面活性剂及

蛋白酶抑制剂的选择

四、 蛋白质的沉淀与浓缩

五、 蛋白质的定量

六、 样品污染物的去除

8样品预分级的主要方法包括根据蛋白质溶解性和蛋白质在细胞中不同的细胞器定位进行分级，如专门分离出细胞核、线粒体或高尔基体等细胞器的蛋白质成分。通过对样品进行预分级不仅可以提高低丰度蛋白质的上样量和检测，还可以针对某一细胞器的蛋白质组进行研究。

24细胞的破碎裂解

(一)温和的裂解方法

渗透溶解法2.冻融裂解3.表面活性剂裂解4.酶溶法

(二)猛烈的细胞破碎方法

1.超声波处理2压力杯法33.研磨法4.机械匀浆法5玻璃珠匀浆法

6影响电泳分离效果的因素

1)待分离生物大分子的性质

待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。

(2)缓冲液的性质

缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产生影响，溶液pH值离等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大，尤其对于蛋白质等两性分子，缓冲液pH还会影响到其电泳方向，当缓冲液pH大于蛋白质分子的等电点，蛋白质分子带负电荷，其电泳的方向是指向正极。另外缓冲液的粘度也会对电泳速度产生影响。

电场强度

电场强度(V/cm)是每厘米的电位降，也称电位梯度。电场强度越大，电泳速度越快。

电渗

液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象。由于支持介质表面可能会存在一些带电基团，如滤纸表面通常有一些羧基，琼脂可能会含有一些硫酸基，而玻璃表面通常有Si-OH基团等等。

10温和破碎法

11染色方法：

1胶体考马斯亮蓝染色

2胺基黑染色

转印至聚偏二氟乙烯（PVDF）上的蛋白质的染色

转印至硝酸纤维素膜上的蛋白质的染色

3银染

4负染

主要包括金属盐染料、锌一咪唑

5胶体扩散染料。主要包括印度墨水染料、胶体金属染料等

6有机荧光团染料

7金属螯合染料

23双向电泳（twodimensionalelectro-phresis,2-DE）原理：

根据蛋白质的两个一级属性（等

电点