可诱导共刺激分子基因修饰的骨髓间充质干细胞对小鼠急性移植物抗宿主病的影响的开题报告.docxVIP

可诱导共刺激分子基因修饰的骨髓间充质干细胞对小鼠急性移植物抗宿主病的影响的开题报告

一、研究背景及意义

急性移植物抗宿主病（aGVHD）是造血干细胞移植（HSCT）的主要并发症之一，严重限制了HSCT的临床应用。当前针对aGVHD的治疗方法主要包括免疫抑制剂、细胞治疗、免疫调节等策略，但仍有一定局限性。近年来，随着基因编辑技术的发展，利用基因编辑技术修饰干细胞的免疫特性已成为预防和治疗aGVHD的新思路之一。

骨髓间充质干细胞（BMSCs）作为一种重要的干细胞资源，具有广泛的分化和免疫调节能力。研究表明，BMSCs对aGVHD具有一定的治疗作用。然而，BMSCs的治疗效果受到细胞来源、种群异质性、存活率等因素的限制。因此，如何提高BMSCs的治疗效果是当前研究的热点问题之一。

可诱导共刺激分子（ICOS）是一种重要的共刺激分子，参与了T细胞的激活和增殖，是免疫应答的关键调节因子。近年来，研究发现ICOS参与了移植物抗宿主反应的发生和发展，并成为aGVHD治疗的新靶点。因此，本研究拟探究利用基因编辑技术修饰BMSCs的ICOS基因，提高其调节T细胞抗原特异性和抑制aGVHD的能力，为HSCT的临床应用提供新的解决方案。

二、研究目的

本研究旨在利用基因编辑技术修饰BMSCs的ICOS基因，探究其对小鼠急性移植物抗宿主病的影响，以期提高BMSCs治疗aGVHD的效果。

三、研究内容及方法

（一）研究内容

1.构建ICOS基因敲除和过表达的BMSCs株系；

2.检测BMSCs株系中ICOS基因的表达水平；

3.检测修饰后的BMSCs对小鼠T细胞的增殖和分泌因子表达的影响；

4.小鼠移植模型建立；

5.观察不同BMSCs株系对小鼠GVHD发展的影响。（二）研究方法

1.利用CRISPR/Cas9技术构建ICOS基因敲除和过表达的BMSCs株系；

2.利用实时荧光定量PCR检测BMSCs株系中ICOS基因的表达水平；

3.利用MTT法和ELISA方法检测不同BMSCs株系对小鼠T细胞增殖和分泌因子表达的影响；

4.采用小鼠移植模型，通过静脉注射细胞使小鼠发生GVHD；

5.观察小鼠发病时间、病程、临床表现和生存率等指标，评估不同BMSCs株系对小鼠GVHD发展的影响。

四、预期结果与意义

本研究将利用基因编辑技术修饰BMSCs的ICOS基因，探究其对小鼠GVHD发生的影响。通过考察不同BMSCs株系对小鼠GVHD发展的影响，评估ICOS基因修饰BMSCs治疗GVHD的效果，为HSCT治疗aGVHD提供新的治疗思路。