原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
〔完整word版〕蓝白斑筛选原理及问题总结
[资源共享]蓝白斑筛选原理及问题总结
1问题：做转化时，用蓝白斑筛选，以获得阳性克隆。那它和直接利用AMP抗性，而不用蓝白斑筛选，有什么区别吗？蓝白斑
筛选有什么作用吗？
对于这一问题，我想，抗性筛选是防止杂菌生长。理论上说，当培养基中含有抗生素时，只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖。蓝白筛选是验证是否有插入片断。两者结合起来，更有利于筛选到我们的目的菌。
2问题：如果加了AMP、IPTG和X-Gal，长出来的白斑一定都是含有插入片段的吗？有没有可能是载体自连的？
答：可以说，世界上没有绝对的事情，即使加了AMP、IPTG和X-Gal，长出来的白斑也不一定都是含有插入片段的阳性克隆，
具体原因可能有：
1〕有可能是载体自连的假阳性；
2〕作时AMP、IPTG和X-Gal其中一种或几种没涂均匀。
3〕有时即使插入片段也会出现篮斑。只要编码框没被破坏。
3问题：如何筛选重组菌落?
答：可使用蓝/白斑筛选法，在涂布有IPTG和X-Gal的筛选平板上，重组菌株为白色，未转入重组质粒的菌株为蓝色。
4问题：蓝白斑筛选如何筛选适宜的宿主菌株?
答：如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉〔lacZΔΜ15〕。TOP10和DH5α都
能用于蓝/白斑筛选。
5问题：在蓝白斑筛选的过程中没有蓝斑是什么原因导致的？因为通过PCR检测插入片段的大小说明所挑的白斑克隆并没有插
入片段。
答：原因很多，1〕可能是你用的培养基含有乳糖或葡萄糖，因为半乳糖甘酶会分解乳糖，导致不能与X-Gal反响，葡萄糖不会诱导融合基因的表达。2〕作时AMP、IPTG和X-Gal其中一种或几种没涂均匀。3〕很多因素会造成PCR失败。
6问题：我最近转化大肠杆菌时，通过蓝白斑筛选，挑出白色菌落做PCR，可是在电泳时发现在有目的带的同时还有比目的带
小的杂带，不知为什么？我反复筛了几次，都是这样，可不可以摇菌提质粒？我应该下一步怎么做？
答：针对这样的情况，我觉得，你首先做酶切鉴定，看看你的目的片段是否真正插入。其次，你应该检测PCR过程有没有问题。
7问题：我用Amp-IPTG-X-galLB平板进行蓝白斑筛选重组子，为何筛出的全是白斑，没一个蓝斑，挑几个白斑摇菌扩增后PCR
检测也全是阳性克隆，不会全都重组成功了吧？什么原因呢？
答：这样的情况是完全有可能的，只要载体处理的好，应该说是有这种可能。
蓝白斑筛选原理：
蓝白斑筛选是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的
文档评论（0）