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·论著·JMedRes,April2023,Vol.52No.4

核定位CBFβ基因重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

关天富段莉王大平

摘要目的构建携带核定位信号的核结合因子(nuclearlocationsignalcorebindingfactorbeta,NLS-CBFβ)的重组腺相

关病毒载体,从而实现体外诱导关节液间充质干细胞成软骨分化。方法使用分子生物学方法将腺相关病毒载体与NLS-

CBFβ基因相结合,构建pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒;采用PEI转染法将pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒和pAAV-

RC、pAAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装并生产携带CBFβ的重组腺相关病毒rAAV-NLS-CBFβ-RFP,进一

步将病毒感染人关节液来源间充质干细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(real-timefluorescentquantitativepolymerasechainreac-

tion,qRT-PCR)检测CBFβ基因在细胞内的表达水平。结果双酶切及DNA测序证明NLS-CBFβ已成功构建到pAAV-

NLS-CBFβ-RFP表达质粒中,AAV-293细胞表达红色荧光蛋白提示共转染成功,包装的重组腺相关病毒rAAV-CBFβ-RFP

感染人关节液间充质干细胞后,能显著增加细胞中CBFβ基因的表达水平。结论携带NLS-CBFβ重组腺相关病毒的包装成

功,并能在人关节液间充质干细胞中有效转染和表达,为进一步探索rAAV-NLS-CBFβ诱导间充质干细胞成软骨分化的研究

提供了实验基础。

关键词核定位信号核结合因子腺相关病毒软骨分化间充质干细胞

中图分类号R684文献标识码ADOI10.11969/j.issn.1673-548X.2023.04.008

ConstructionandIdentificationofNuclearLocalizationCBFβGeneRecombinantAdeno-associatedVirusVector.GUANTianfu,DUAN

Li,WANGDaping.ShantouUniversityMedicalCollege,Guangdong515031,China

AbstractObjectiveToconstructtherecombinantadeno-associatedvirus(rAAV)vectorwhichcarryingnuclearlocationsignal

corebindingfactorbeta(NLS-CBFβ),andinducechondrogenicdifferentiationofarticularfluidmesenchymalstemcellsinvitro.

MethodspAAV-NLS-CBFβ-RFPexpressionplasmidwasconstructedbycombiningadeno-associatedvirusvectorwithNLS-

CBFβgeneusingmolecularbiologymethod.pAAV-NLS-CBFβ-RFPexpressionplasmid,pAAV-RCandpAAV-Helperplasmid

wereco-transfectedintotheAAV-293cellsbyPEItransfectionmethod,recombinantadeno-associatedvirusrAAV-NLS-CBFβ-

RFPcarryingCBFβwaspackedandproduced,theviruswasfurtherinfectedwithhumansynovialfluidmesenchymalstemcells,theex-

pressio