临八-----高校----五、脂类细胞化学——苏丹Ⅲ染色法.docVIP

SDU2012级临八高校2012172320232013.10.21

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五、脂类细胞化学——苏丹Ⅲ染色法

【实验目的】

了解脂肪染色的原理、操作步骤及脂类标本制片原理。

【实验原理】

脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。

脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。

脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。

用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、铺片法

【实验材料】

试剂：苏丹Ⅲ染液、70%乙醇溶液、甲醛钙

器具：显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，镊子，剪刀

材料：小鼠

【实验步骤】

断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定20分钟。

吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。

用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。

用苏丹Ⅲ染色30分钟

吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，用显微镜观察。

【实验结果】

镜检照片：

【实验结果分析与注意事项】

制片过于小心，未对肠系膜适度抻拉，导致细胞堆叠，观察效果不好