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第七章酵母菌的基因工程
DividingSaccharomycescerevisiae(baker’syeast)cells
一.酵母克隆载体
①能在E.coli中克隆和扩增。
Ori
②有大肠杆菌的选择标记
rr
Amp、Tet。
有酵母的选择标记
++++
Leu2、His、Ura3、Trp1;
④有合适的克隆位点。
（1）整合型载体(YIp)
由大肠杆菌质粒和酵母的DNA片断（选
择标记）构成。
如PYeleu10:
ColE1酵母Leu2+
特点：
①转化率低（1-10转化子/微克DNA）。
②不能在酵母细胞中自主复制
载体上只有细菌的复制区，没有酵
母的自主复制区。
③整合到酵母的染色体上
可与受体细胞的染色体DNA同源重组，
随染色体一起复制。
④不能从酵母细胞中提取载体。
（2）复制型载体(YRp)
由大肠杆菌质粒和酵母的DNA片断(选择标记
和酵母DNA自主复制顺序ARS）构成。
大肠杆菌质粒酵母ARS酵母选择标记
ARS
ARS（automouslyreplicatingsequence）:
250bp
保守区ATTTTATATTTA
TGT
特点：
23
①转化率高（10-10转化子/微克DNA)。
②可从大肠杆菌和酵母中提取质粒。
③穿梭载体（shuttlevector）
既能在大肠杆菌中复制，又能在酵母
细胞中自主复制。
④不稳定，容易丢失。
（3）着丝粒质粒(YCp)
在YRp质粒中插入酵母染色体的着丝粒区。
YRp质粒酵母着丝粒
特点：
①行为像染色体，能稳定遗传。
②单拷贝存在。
③不易从细胞中提取。
特点：
35
①很高的转化活性（10-10转化子/微克
DNA）.
②拷贝数多（25-100分子/细胞）。
③比YRp稳定。
YEp24
二.酵母转化和表达的一般过程
CaCl、
酶去壁2
-
Leu酵母原生质体PEG感受态
提取
大肠杆菌酵母载体插入外源基因转化
Leu营
转化子克隆生长缺陷型整合到染色体上，
培养基
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