Taqman探针的合成及黄瓜绿斑驳花叶病毒RTF-PCR检测方法的建立的开题报告.docxVIP

Taqman探针的合成及黄瓜绿斑驳花叶病毒RTF-PCR检测方法的建立的开题报告

一、研究背景:

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV)是一种单股正链的RNA病毒，属于十字花科植物病毒组。该病毒的感染会导致瓜类、茄果类等作物的严重减产甚至死亡，严重影响了农业生产。因此，对其进行高效、快速、准确的检测具有重要意义。在病毒的诊断中，RT-PCR技术得到广泛应用，而Taqman探针因其能准确定量且适用于快速检测等特点，已经被广泛用于病毒的检测中。在此背景下，本研究将通过合成Taqman探针并探究其应用于黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-PCR检测方法，为其在病毒检测中的应用提供可靠的分子工具。

二、研究内容及目标：

1.合成定量Taqman探针，建立黄瓜绿斑驳花叶病毒的RT-PCR检测体系。

2.优化检测方法参数，建立检测标准曲线及最佳反应条件，对Taqman探针的检测性能进行评估。

3.通过对实际样品的分析验证RT-PCR检测方法的可靠性与准确性。

三、研究方法：

1.合成Taqman探针，构建RT-PCR反应体系，进行RT-PCR反应优化并确定最佳检测条件。

2.构建标准曲线，评估Taqman探针的灵敏度、特异性、稳定性等检测性能，并建立检测体系的标准操作规程。

3.对从实际样品中提取的RNA进行RT-PCR反应，验证RT-PCR检测方法的可靠性。

四、预期结果：

1.成功合成定量Taqman探针，并建立了可靠的黄瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR检测体系。

2.成功建立检测标准曲线，对RT-PCR检测方法的检测性能进行评估，并成功构建了检测标准操作规程。

3.通过对实际样品的分析验证RT-PCR检测方法的可靠性，并成功应用于黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测中。

五、参考文献：

1.JVerhoeven,GJanssens,MBaeyen,LDeClercq.ValidationofaSYBRGreen-basedreal-timePCRassayfordetectionofCitrustristezavirusincitrus-hostedmiRNAs.JVirolMethods.2016Sep;236:116-25.

2.EMahajan,PChandel,PChaudhary,NSingh,KSingh,PKalyani.Developmentofduplexreal-timePCRassayforrapidandsimultaneousdetectionofIndiancitrusringspotvirusandcitrustristezavirusincitrus.EurJPlantPathol.2017Mar;147(3):661-670.

3.BWu,MLi,GLi,YLi,GLi,SLi.Developmentofreal-timeRT-PCRassaysforthedetectionofTomatospottedwiltvirusindifferenthostplants.SciRep.2017Nov;7(1):8036.