双重识别基团蛋白质印迹树脂的制备和天然蛋白质酶活性的测定的开题报告.docxVIP

双重识别基团蛋白质印迹树脂的制备和天然蛋白质酶活性的测定的开题报告

一、研究背景

生物化学和分子生物学的发展推动了分子生物学的快速发展，分子生物学的研究对象是生物大分子，主要包括蛋白质、核酸、多糖等。其中，蛋白质是构成生物体及其器官的重要结构与功能单位，在生物学、生物技术、医药等领域都具有广泛的应用价值。因此，研究蛋白质的分离、纯化及其性质分析，是分子生物学领域的重要内容。

在蛋白质分离及其性质分析中，以蛋白质的亲和性作用为基础的纯化技术已经成为一种重要的手段。基于亲和性的纯化技术可简单快捷地纯化含有特定成分的物质，而且具有高纯度和高单一性的特点。因此，亲和作用的有选择性和高效性是亲和性纯化技术得以推广的主要原因。

印迹法是一种常用的蛋白质检测方法，通过印迹实现对蛋白质的探测和分离。传统的印迹法仅限于蛋白质与分子探针的相互作用，且印迹后难以定量分析。因此，新的印迹技术应运而生，双重识别基团蛋白质印迹技术就是其中的一种。

双重识别基团蛋白质印迹技术采用双重识别基团作为分子探针，以提高蛋白质的识别和分离效率。与传统印迹技术相比，双重识别基团蛋白质印迹技术可定量检测蛋白质，并实现对其结构与功能的研究。因此，该技术具有广泛的应用前景。

二、研究内容

本研究旨在制备双重识别基团蛋白质印迹树脂，并利用该技术测定天然蛋白质的酶活性。

制备双重识别基团蛋白质印迹树脂的主要步骤如下：

1.合成双重识别基团融合物；

2.合成交联剂，并与双重识别基团融合物反应；

3.将反应产物固定在树脂基质上。

测定天然蛋白质的酶活性的主要步骤如下：

1.将待测样品与制备好的双重识别基团蛋白印迹树脂反应，并去掉未结合的蛋白质；

2.加入包含底物的反应体系，并测定反应体系的吸光度变化；

3.测定各反应体系的吸光度值，分析酶活性的差异并定量分析。

三、研究意义

制备双重识别基团蛋白质印迹树脂并应用于天然蛋白质酶活性测定，对以下方面有着重要意义：

1.丰富了蛋白质纯化和鉴定方法，为生物大分子及其结构与功能的研究提供了一种新的手段；

2.提高了蛋白质检测的灵敏度和准确性，有助于临床医学、药物研发等领域的应用；

3.为开发更为复杂的双重识别基团蛋白质印迹技术奠定了基础。

四、研究方法

1.合成双重识别基团融合物：选取不同种类的有机化合物作为识别基团，经过有机合成方法合成双重识别基团融合物。

2.合成交联剂：采用不同的合成方法合成不同种类的交联剂。并与双重识别基团融合物反应。

3.将反应产物固定在树脂基质上，制备双重识别基团蛋白质印迹树脂。

4.针对不同的酶类选择不同的底物，测定个样本的吸光度变化，分析酶活性的差异并定量分析。