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DNA的生物合成(复制);修复合成: DNA受到损伤(突变)后进行修复,;子代DNA;全称:依赖 DNA的 DNA聚合酶 简称:DNA-pol;本章内容;半保留性
双向性
半不连续性;子链继承母链遗传信息的几种可能方式;半保留复制的意义;二、双向复制 (BidirectionalReplication);+;在原核生物双向复制中,DNA被描述为眼睛状。为说明方便而做的图为θ(Theta)形。;;对于细菌、质粒和某些病毒的小环形DNA复制,一个复制起点往往就足够了,产生的两个复制叉再环形染色体和起点相对的位置汇合后,复制即告完成。;真核生物每个染色体有多个起始点,是多复制子(Multireplicon)的复制。
习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(Replicon)。复制子是独立完成复制的功能单位。;;三、半不连续复制
semi-discontinuousreplication;顺着解链方向生成的子链,复制是连续进行的,这股链称为领头链。
另一股链因为复制的方向与解链方向相反,不能顺着解链方向连续延长,这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为冈崎片段(okazakifragment)。
领头链连续复制而随从链不连续复制,就是复制的半不连续性。;1968年日本生化学者冈崎用电镜及放射自显影技术,观察到DNA复制中出现一些不连续的片
段,将这些不连续的片段称为冈崎片段。
原核生物: 1000~2000个核苷酸
真核生物: 100~200个核苷酸;DNA复制的酶学;;以单链 DNA为模板
以 dNTP为原料;全称:依赖 DNA的 DNA聚合酶
(DNAdependentDNApolymerase)
简称:DNA-pol
活性:1. 5′→3′的聚合活性
2. 核酸外切酶活性;;DNA聚合酶的种类;分子量(kD );单肽链
首先被发现,当时称为复制酶(replicase)含量最多
用特异的蛋白酶处理后可水解成两个片段:
—小片段(N端)
—大片段(C端);DNA-pol Ⅰ(109kD);小片段323个氨基酸
5′ → 3′核酸外切酶活性;具有5 ′ →3 ′的聚合酶活性
只是在无polⅠ及 polⅢ的情况下暂时起作用
对模板的特异性不高, 参与DNA损伤的应急状态修复(SOS修复)。;DNA-pol Ⅲ(250kD);α、ε、θ亚基组成核心酶;DNA聚合酶(核心酶)的三维结;DNA聚合酶Ⅲ全酶结构;两边的 β 亚基( DNA夹子)起着夹稳模板链,负责酶沿DNA模板滑动的作用。;E.Coli中的DNA聚合酶;DNA-polα;真核生物的 DNA聚合酶;复制按照碱基配对规律进行,是遗传信息能 准确传代的基本原理。
复制保真性的酶学机制:
(一)DNA-pol的核酸外切酶活性和即时校读
(二)复制的保真性和碱基选择;A:DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基;并用其聚合活性掺入正确配对的底物。
B:碱基配对正确,DNA-pol不表现活性。;DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价(氢键)与共价(磷酸二 酯键)键的有序形成。
DNA-polIIIε亚基具有碱基选择功能。
嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型,与相应的嘧啶形成氢键
配;遵守严格的碱基配对规律;
聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能;
复制出错时 DNA-pol的即时校读功能。
DNA复制的精确度极高,在细菌中其误差只有10-8~10-10左右。;DNA分子的碱基埋在双螺旋内部,只有把 DNA
解成单链,它才能起模板作用。;(一)解螺旋酶、引物酶和单链 DNA结合蛋白;(rep蛋白,DnaB,解链酶)
模板对复制的指导作用在于碱基的准确配对,而碱基却埋在双螺旋的内部,只有把DNA解开成
单链,它才能起模板作用。
作用是利用ATP供能,解开DNA双链。;依赖DNA的RNA聚合酶。
对利福平不敏感。
可以催化游离NTP聚合。
在大肠杆菌,是dnaG基因的表达产物。
催化RNA引物的生成。
引物作用:为DNA聚合提供3-OH末端。;与DNA单链紧密结合。
为同源四聚体。
有正协同效应。
是不断地结合、脱离的。
SSB的作用:
维持模板处于单链状态并保护单链的完整。;拓扑:;既能水解、又能连接磷酸二酯键
分类:
拓扑异构酶Ⅰ拓扑异构酶Ⅱ;曾用名:原核生物— ω-蛋白
真核生物—转轴酶、解缠酶、切口-
封闭酶
和松弛酶
主要作用:切开DNA双链中的一股,使DNA解链旋转中不打结,在适当时候又把切口封闭,使DNA变为松弛状态。
化反应不需ATP;在原核生物又叫旋转酶(gyrase)。
真核生物中又分为几种亚型。
无ATP时,能切断DNA双链,使螺旋松弛。
在利用ATP供能下,连接断端,松弛的
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