tl2 DNA复制课件(最新整理版).pptxVIP

DNA的生物合成(复制);修复合成： DNA受到损伤（突变）后进行修复，;子代DNA;全称：依赖 DNA的 DNA聚合酶 简称：DNA-pol;本章内容;半保留性

双向性

半不连续性;子链继承母链遗传信息的几种可能方式;半保留复制的意义;二、双向复制 (BidirectionalReplication);+;在原核生物双向复制中，DNA被描述为眼睛状。为说明方便而做的图为θ(Theta)形。;;对于细菌、质粒和某些病毒的小环形DNA复制，一个复制起点往往就足够了，产生的两个复制叉再环形染色体和起点相对的位置汇合后，复制即告完成。;真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子(Multireplicon)的复制。

习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(Replicon)。复制子是独立完成复制的功能单位。;;三、半不连续复制

semi-discontinuousreplication;顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。

另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为冈崎片段(okazakifragment)。

领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。;1968年日本生化学者冈崎用电镜及放射自显影技术，观察到DNA复制中出现一些不连续的片

段，将这些不连续的片段称为冈崎片段。

原核生物: 1000~2000个核苷酸

真核生物: 100~200个核苷酸;DNA复制的酶学;;以单链 DNA为模板

以 dNTP为原料;全称：依赖 DNA的 DNA聚合酶

(DNAdependentDNApolymerase)

简称：DNA-pol

活性：1. 5′→3′的聚合活性

2. 核酸外切酶活性;;DNA聚合酶的种类;分子量（kD );单肽链

首先被发现，当时称为复制酶(replicase)含量最多

用特异的蛋白酶处理后可水解成两个片段:

—小片段(N端)

—大片段(C端);DNA-pol Ⅰ（109kD）;小片段323个氨基酸

5′ → 3′核酸外切酶活性;具有5 ′ →3 ′的聚合酶活性

只是在无polⅠ及 polⅢ的情况下暂时起作用

对模板的特异性不高, 参与DNA损伤的应急状态修复(SOS修复)。;DNA-pol Ⅲ(250kD);α、ε、θ亚基组成核心酶;DNA聚合酶(核心酶)的三维结;DNA聚合酶Ⅲ全酶结构;两边的 β 亚基( DNA夹子)起着夹稳模板链，负责酶沿DNA模板滑动的作用。;E.Coli中的DNA聚合酶;DNA-polα;真核生物的 DNA聚合酶;复制按照碱基配对规律进行，是遗传信息能 准确传代的基本原理。

复制保真性的酶学机制：

（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和即时校读

（二）复制的保真性和碱基选择;A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活性掺入正确配对的底物。

B：碱基配对正确，DNA-pol不表现活性。;DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二 酯键）键的有序形成。

DNA-polIIIε亚基具有碱基选择功能。

嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键

配;遵守严格的碱基配对规律；

聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能；

复制出错时 DNA-pol的即时校读功能。

DNA复制的精确度极高，在细菌中其误差只有10-8～10-10左右。;DNA分子的碱基埋在双螺旋内部，只有把 DNA

解成单链，它才能起模板作用。;（一）解螺旋酶、引物酶和单链 DNA结合蛋白;（rep蛋白，DnaB，解链酶)

模板对复制的指导作用在于碱基的准确配对，而碱基却埋在双螺旋的内部，只有把DNA解开成

单链，它才能起模板作用。

作用是利用ATP供能，解开DNA双链。;依赖DNA的RNA聚合酶。

对利福平不敏感。

可以催化游离NTP聚合。

在大肠杆菌，是dnaG基因的表达产物。

催化RNA引物的生成。

引物作用：为DNA聚合提供3-OH末端。;与DNA单链紧密结合。

为同源四聚体。

有正协同效应。

是不断地结合、脱离的。

SSB的作用：

维持模板处于单链状态并保护单链的完整。;拓扑：;既能水解、又能连接磷酸二酯键

分类：

拓扑异构酶Ⅰ拓扑异构酶Ⅱ;曾用名：原核生物— ω-蛋白

真核生物—转轴酶、解缠酶、切口-

封闭酶

和松弛酶

主要作用：切开DNA双链中的一股，使DNA解链旋转中不打结，在适当时候又把切口封闭，使DNA变为松弛状态。

化反应不需ATP;在原核生物又叫旋转酶(gyrase)。

真核生物中又分为几种亚型。

无ATP时，能切断DNA双链，使螺旋松弛。

在利用ATP供能下，连接断端，松弛的