MiRNA-485-5p在膀胱癌中表达及对膀胱癌细胞生物学特性影响的实验研究.pdf

摘要

摘要

背景和目的：

Bladdercancer,BC

膀胱癌（）是泌尿系统最常见恶性肿瘤之一，近年来发病

率逐渐升高。虽然初诊患者中约75%为非肌层浸润性尿路上皮癌，但因其具有

高复发特点，且随着膀胱癌的复发，恶性程度逐渐进展。当前膀胱癌综合治疗

取得了一定疗效，但对于浸润性、高级别、分期晚的膀胱癌患者预后仍较差，

肿瘤特异性死亡率仍较高。目前认为肿瘤相关基因的研究对于肿瘤的诊治非常

重要，大部分肿瘤已经有靶向药物用于临床，但膀胱癌目前仍没有非常合适的

靶向药物。故对膀胱癌基因靶点的研究亟待加强。

目前在恶性肿瘤的研究中，肿瘤的发生被认为与多种基因的异常表达密切

相关，抑癌基因和促癌基因在肿瘤的发展中扮演着重要的角色，对肿瘤相关基

MicroRNA22

因的研究已逐渐成为肿瘤治疗领域的前沿。是一种长约个核苷酸

的短链非编码RNA分子，可与信使RNA的3非翻译区互补结合，通过靶向调

节mRNA的翻译和降解来调控基因表达，发挥着抑癌基因或促癌基因的作用。

研究显示，miR-485-5p参与多种肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭，与肿瘤

的发生发展密切相关，并证实其在肿瘤中低表达，发挥抑癌基因作用。但是，

miR-485-5p在卡波西肉瘤患者血清和卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染细胞中表达

升高，对细胞的增殖、迁移等起促进作用。可见miR-485-5p在不同肿瘤中的表

达不同，发挥作用不同。目前，miR-485-5p在膀胱癌中的作用及分子机制不明

确。研究表明，MFGE8可以增强巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬和清除。MFGE8

是否是miR-485-5p的靶基因，是否影响膀胱癌发生、发展，目前暂不明确。

本课题研究miR-485-5p对膀胱癌增殖、迁移等生物学行为的影响，证实

MFGE8作为miR-485-5p的靶基因之一参与膀胱癌的发生、发展，并阐述其分

子机制。

方法:

1.通过qRT-PCR检测16对膀胱癌及癌旁组织中miR-485-5p的表达水平。

2.qRT-PCRT24EJJ825637UMUC-3

通过检测膀胱癌细胞（、、、、）及膀胱

上皮永生细胞（SV-HUC-1）中miR-485-5p表达水平，并选取miR-485-5p表达

II

摘要

最低的2个膀胱癌细胞系（T24、EJ）进行过表达、选择表达相对较高的2个膀

5637UMUC-3

胱癌细胞系（、）进行抑制表达以开展后续实验。

3.过表达和敲减膀胱癌细胞中miR-485-5p，并检测miR-485-5p表达情况。

利用CCK-8实验观察细胞的生长曲线，通过平板克隆实验检测细胞集落形成能

力，Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力，并通过WesternBlot实验检测与细

胞凋亡相关蛋白的表达。

4.通过miRBase、TargetScan和miRanda数据库筛选miR-485-5p潜在的靶基

MFGE8miR-485-5pMFGE8

因：。双荧光素酶实验验证与的靶向关系。过表达

miR-485-5pWBMFGE8

和敲减膀胱癌细胞，实验检测蛋白水平变化。

5.T24及EJ转染MFGE8过表达质粒，5637及UMUC-3转染siMFGE8，WB

实验检测MFGE8蛋白