植物组织培养的基本技术.ppt

第二节植物组织培养实验室结构、仪器设备及基本技术;一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：

完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。

但从功能上至少包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。;化学实验室（准备室）;接种室及培养室;;;;接种室、培养室面积及超净工作台、培养架等数量需要根据生产目的和规模确定。

通常每台单人超净工作台可年产组培苗10-15万株，每个培养架每年可培养无菌苗1.5－2.0万株，因此年产100万株组培苗，需设置8-10台超净工作台，培养架40-50个。

每台超净工作台占地面积约7-8M2，两个10-12M2，培养架（）占地1.5－2.0M2，因此年产100万株组培苗，需要接种室面积40-50M2，培养室面积100-120M2。;（一）化学实验室（准备室）：

1.主要功能：

用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。

;2.主要仪器设备及用品：

冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。;百分之一天平;各种型号的高压灭菌锅;移液器;（二）接种室（无菌操作室）：

1、功能：植物材料的表面灭菌、接种以及培养物的继代转接等。

接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。;;超净工作台;（三）培养室：

1、功能：主要用于植物材料的培养。

要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。;2、仪器设备及用品：

培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、温湿度计灯等。;光照培养箱;恒温振荡器;（四）细胞学实验室：

1、功能：主要用于培养材料的显微观察及照相等。;2、仪式设备及用品：

体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套??微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。;体视显微镜;二、实验室基本技术：

（一）洗涤：

1.普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。

2.难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。

;（二）灭菌：

1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。

（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150℃保温2小时，成本较高，目前应用较少。

（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内121℃15－20分钟。

（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。

;;各种类型的细菌过滤器;4、外植体的表面灭菌：

采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－0.2%的氯化汞（2-15分钟）等。杀菌剂中加入几滴吐温－20或80（Tween－20或80）效果较好。;;（三）无菌操作：

1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理，进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。

2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。;3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。

4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，并在灭菌后清洗，以减少污染源。

5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。

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