地衣芽孢杆菌ＷＸ－０２补硝酸钠发酵产聚γ－谷氨酸工艺.docxVIP

地衣芽孢杆菌WX-02补硝酸钠发酵产聚Y一谷氨酸工艺

作者：许尚华，胡丽芳，陈守文

来源：《湖北农业科学》2014年第4期

许尚华，胡丽芳，陈守文

(华中农业大学农业微生物国家重点实验室，武汉430070)

摘要：以地衣芽抱杆菌(Bacilluslicheniformis)WX—02为研究对象，以提高其发酵产生的聚Y-谷氨酸的产量为研究目的，经摇瓶发酵得到优化的硝酸钠补料方案，即初始硝酸钠浓度为10g/L，发酵至12h时补加5g/L硝酸钠时聚Y—谷氨酸产量最大。将此补料方案在3L发酵罐上进行验证。结果表明，发酵得到的菌体生物量和聚Y—谷氨酸产量最大值分别为4.5g/L和38.7g/L，与对照相比分别提高55.2%和14.8%。通过补硝酸钠可以提高菌体生物量和对谷氨酸的利用率，从而提高聚Y—谷氨酸的发酵水平。

关键词：地衣芽抱杆菌(Bacilluslicheniformis)；聚￥—谷氨酸；硝酸钠；补料发酵；生物量

中图分类号：TQ920.6

文献标识码：A

文章编号：0439—8114(2014)04—0903-04

聚Y—谷氨酸(poly—gamma—glutamicacid，简称y—PGA)是一种微生物合成的高分子聚合物，由D—谷氨酸或L—谷氨酸单体通过a—氨基和y—羧基缩合后形成的肽键连接而成。由于分子链上带有大量的游离羧基，使其在食品加工、微生态制剂、农业、医药和水处理等领域有广泛的应用［1—3］。

补料分批发酵是指在发酵过程中加入一种或几种培养基成分，并不取出发酵液［4］。该方法可有效提高菌株生长和目的产物的生成，受到众多研究者的关注。目前，在Y—PGA的微生物发酵中，碳氮源、无机盐以及前体物的选择和添加都是研究者用来提高y—pga产量的方法。吕萌等［5］研究了枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)HCUL—b—115补糖发酵y—pga，发现糖浓度低于20g/L时补加200g/L的玉米糖化液50mL可使菌体大量生长，y—PGA产量提高到52.2g/L。胡丽芳等［6］也通过补加葡萄糖研究了地衣芽抱杆菌(Bacilluslicheniformis)WX—02发酵Y—PGA的情况，发现初始葡萄糖浓度为70g/L，发酵至15h时补加15g/L葡萄糖，发酵终点菌体生物量和Y—pga产量分别提高了56%和50%。柠檬酸和谷氨酸作为Y—PGA合成的重要前体物，经研究发现B. licheniform

isATCC9945A利用完柠檬酸后分别以1.44g/h和2.4g/h的速率补加柠檬酸和谷氨酸，4h后Y—PGA产量可达35g/L［7］。在y—PGA发酵过程中，y—pga的存在使发酵液黏稠，使菌体对营养物质的吸收较难，且摄氧受到一定影响，而硝酸钠既可作为一种无机氮源，同时硝酸盐的强氧化性使其可作为最终电子受体，为菌体的生长提供能量［8］°Cheng等［9］研究发现B. licheniformisA3

5在硝酸盐呼吸的条件下可合成y—PGAoXu等［10］对Pseudomonasaeruginosa进行研究发现硝酸盐不仅影响其细胞生长速率，还影响其细胞表型和代谢合成。本研究探讨了硝酸钠浓度和补料发酵对地衣芽抱杆菌（B.licheniformis）WX-02合成y—PGA的影响，为工业化硝酸钠补料发酵提高Y—PGA产量提供依据。

1材料与方法

材料

菌株地衣芽抱杆菌WX-02，由华中农业大学农业微生物学国家重点实验室筛选和保藏，保藏号为CCTCCM208065。

培养基斜面培养基：蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，NaCl40.0g/L，琼脂20.0g/L，pH7.2?7.4；种子培养基：蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，NaCl40.0g/L，pH

7.2?7.4；发酵培养基：葡萄糖70.0g/L，谷氨酸钠80.0g/L，NH4Cl8.0g/L，K2HPO4?3H2O1.0g/L，MgSO4?7H2O1.0g/L，pH7.2?7.4。

方法

1.2.1基培养方法摇瓶培养：从新鲜斜面培养基中挑一环菌于种子培养基中，控制摇床温度37°C，转速180r/min培养11h，按体积比2%的接种量接入装有50mL发酵培养基的250mL摇瓶中，37C，180r/min培养35h。发酵罐培养：3L发酵罐装液量1.5L，控制温度37C，转速600r/min，通气量1.5L/min，培养35h。

硝酸钠补