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生物分离工程-包含体复性汇报人：AA2024-01-24引言包含体形成及性质分离纯化技术复性策略与方法案例分析：不同生物分离工程实例探讨前景展望与挑战CONTENTS目录01引言CHAPTER生物分离工程概述生物分离工程是生物工程下游技术的重要组成部分，涉及从生物反应体系中分离、纯化和精制目标产物的过程。生物分离工程的主要任务包括产物的分离、纯化、浓缩和干燥等，以及废弃物的处理和资源的回收利用。生物分离工程在生物医药、生物化工、食品工业等领域具有广泛的应用，对于提高产品质量、降低成本和保护环境具有重要意义。包含体复性意义与重要性包含体复性是针对重组蛋白质在宿主细胞中表达后形成无活性的聚集体（包含体）而进行的处理过程，旨在恢复蛋白质的天然构象和生物活性。01包含体复性的意义在于提高重组蛋白质的产量和纯度，降低生产成本，同时改善蛋白质的溶解性和稳定性，提高其生物利用度。02包含体复性的重要性体现在生物医药领域，如基因工程药物的生产中。通过包含体复性技术，可以获得高纯度、高活性的重组蛋白质药物，提高药物的疗效和安全性。此外，在蛋白质组学、酶工程等领域也有广泛的应用前景。0302包含体形成及性质CHAPTER包含体形成机制表达量过高当外源蛋白在宿主细胞中的表达量过高时，蛋白质合成速度超过了宿主细胞的折叠能力，导致部分蛋白质无法正确折叠而形成包含体。环境因素如温度、pH值、离子强度等环境因素的变化，可能影响蛋白质的稳定性和折叠状态，从而促进包含体的形成。蛋白质自身性质某些蛋白质本身具有易于聚集的倾向，如含有高比例疏水氨基酸残基的蛋白质，在表达过程中容易形成包含体。包含体结构与性质不溶性由于包含体中的蛋白质分子未正确折叠，因此它们通常不溶于水或常见的有机溶剂。结构致密包含体通常呈现为致密的颗粒状结构，直径在0.5-3.0μm之间，由无序聚集的蛋白质分子组成。稳定性差包含体中的蛋白质分子处于非天然状态，容易受到蛋白酶的攻击而降解，同时也可能对细胞产生毒性。影响包含体形成因素基因序列某些基因序列可能导致蛋白质表达过程中易于形成包含体，如含有重复序列或高比例疏水氨基酸残基的基因。表达条件表达条件如温度、pH值、培养基成分等的变化，可能影响宿主细胞的生理状态和蛋白质折叠环境，从而影响包含体的形成。宿主细胞类型不同类型的宿主细胞具有不同的蛋白质折叠能力和表达特性，因此可能影响包含体的形成。例如，某些大肠杆菌菌株在表达某些外源蛋白时容易形成包含体。03分离纯化技术CHAPTER细胞破碎与初步分离方法机械法01利用研磨、搅拌或高压均质等方式破碎细胞，适用于微生物和植物细胞。物理法02采用超声波、微波、冻融等技术破碎细胞，适用于多种类型细胞。化学法03使用表面活性剂、酶解剂等破坏细胞膜结构，实现细胞破碎，适用于动物细胞。沉淀法分离纯化原理及应用盐析法1通过加入中性盐降低蛋白质溶解度，使其从溶液中析出，适用于粗提液中去除杂质蛋白。有机溶剂沉淀法2利用有机溶剂降低水溶液介电常数，增加蛋白质分子间静电引力，促进蛋白质聚集沉淀，适用于分离纯化疏水性蛋白质。选择性沉淀法3利用某些试剂与特定蛋白质形成不溶性复合物而沉淀下来，实现目标蛋白质的分离纯化。色谱法在分离纯化中应胶色谱法离子交换色谱法亲和色谱法反相色谱法根据蛋白质分子大小不同，在凝胶介质中实现分离纯化。利用离子交换剂与蛋白质分子间静电作用差异实现分离纯化。利用生物分子间特异性相互作用（如抗原-抗体、酶-底物等）实现目标蛋白质的分离纯化。利用非极性固定相与极性流动相之间相互作用力差异实现蛋白质分离纯化。04复性策略与方法CHAPTER稀释复性法原理及操作要点原理：通过迅速降低包含体蛋白浓度，减少蛋白之间的相互作用，从而避免聚集沉淀的发生。在复性缓冲液中加入适当的添加剂（如L-精氨酸、氧化还原剂等），以促进蛋白的正确折叠和减少聚集。操作要点将变性后的蛋白迅速稀释到复性缓冲液中，使蛋白浓度降低到临界聚集浓度以下。将包含体蛋白溶解在变性剂（如尿素、盐酸胍）中。透析复性法原理及操作要点0104原理：利用透析膜将变性剂逐渐去除，同时添加复性缓冲液和必要的添加剂，使蛋白在逐渐降低的变性剂浓度下缓慢复性。将溶解后的蛋白装入透析袋中，并置于复性缓冲液中透析。0205操作要点通过逐渐更换复性缓冲液，降低变性剂浓度，同时添加必要的添加剂。0306将包含体蛋白溶解在变性剂中。监测透析过程中蛋白的复性情况，如溶解度、聚集状态等。超滤复性法原理及操作要点原理：利用超滤膜将变性剂和低分子量杂质去除，同时浓缩蛋白，使蛋白在浓缩过程中逐渐复性。选择合适的超滤膜，将溶解后的蛋白进行超滤。操作要点在超滤过程中逐渐加入复性缓冲液和必要的添加剂。将包含体蛋白溶解在变性剂中。监测超滤过程中蛋白的复性情况，如溶解度、聚集状态等，并根据