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微柱凝胶技术操作规程

SXYJ-GZ-0228

1目的规范微柱凝胶技术检测操作。

2适用范围采用微柱凝胶技术进行抗人球蛋白试验。

3职责检测者负责按此程序进行微柱凝胶技术操作。

4材料与设备Biovue工作站系统（包括孵育器、离心机）、微柱凝胶卡（Anti-IgG,-C3d;polyspecific）、低离子增强液（BLISS液）、微量加量枪、吸头等、KUBOTAKA-2200型离心机、0.9%无菌生理盐水；根据检测需要准备相应的抗血清及试剂红细胞。

5操作方法

5.1待检标本的准备及要求

患者血清准备不抗凝血样3-5ml，退缩充分，离心3000rpm/5min分离出血清备用。

红细胞悬液的准备EDTA抗凝血样3400rpm/2min（KA-2200型离心机111档离心2次）压积红细胞。取另一小试管作好标记加入190ul生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成4%红细胞悬液；或加入1ml生理盐水，加入压积红细胞10ul，混匀，配制成0.8%红细胞悬液。

5.2直接抗人球蛋白试验

5.2.1取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.2.2加入4%待检红细胞悬液10ul；

离心5min，观察结果。

5.3间接抗人球蛋白试验（添加法）

5.3.1打开孵育器将温度设定为37°C；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

每孔加BLISS液50ul；

加入10ul4%红细胞悬液、或者20ul抗体筛选试剂红细胞（sanquin公司）、或者25ul反定型试剂O细胞（北京金豪公司）；

5.3.4加入患者血清或试剂抗血清40ul；

5.3.537C孵育15min，离心5min，观察结果。

5.4间接抗人球蛋白试验（重悬法）

5.4.14%红细胞1ml加入3ml生理盐水，900g离心5min，弃上清加入4mlBLISS液，配制成浓度为1%的红细胞悬液；

5.4.2打开孵育器将温度设定为37C；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.4.3加入1%的红细胞悬液40ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；

37°C孵育15min，离心5min，观察结果。

5.5间接抗人球蛋白试验（酶处理法）

5.5.1打开孵育器将温度设定为37C；取微柱凝胶卡，做好标记，揭开铝箔封条；

5.5.2加入4%的酶处理红细胞悬液10ul，加入患者血清或试剂抗血清40ul；

5.5.337C孵育15min，离心5min，观察结果。

6结果判定凝集强度判定参考下图标准

阳性结果红细胞凝集为阳性结果，表明红细胞表面存在相应的抗原。无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果。

阴性结果无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明红细胞表面不存在相应的抗原。

7注意事项7.1微柱凝胶卡室温应在剥除铝箔纸1小时之内使用试剂卡。如果柱内的试剂液面位

7注意事项

7.1

微柱凝胶卡室温

应在剥除铝箔纸1小时之内使用试剂卡。如果柱内的试剂液面位

于或低于玻璃珠的顶端，请勿使用该试剂卡。

7.2加样时请勿让移液器吸头接触到反应腔的侧壁，一旦发生触碰，请在向下一反应腔中加样之前更换吸头。

7.3加样后应确保反应物在反应腔中进行孵育，离心前反应物不能与微柱中的抗人球蛋白试剂相混合。

7.4质量控制设置阳性对照一一用含有IgG抗体的人血清或血浆及相关抗原阳性的红细胞进行抗IgG活性分析。然后BLISS添加法或重悬法执行实验；设置阴性对照一一使用不含有非期待红细胞抗体的人血清和血浆及未致敏的红细胞。然后按照BLISS添加法或重悬法执行实验。

7.5实验结束后，从微柱的正、反两面判读凝集和/或溶血结果，在有较强阳性反应的试剂卡一侧读取并记录反应强度。

8依据

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