- 1、本文档共13页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
第六章
第一节分子生物学基本知识
一、DNA和RNA
DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。DNA以核苷酸排列顺序形式储存遗传信
息。
DNA分子由4种核苷酸组成,由碱基互补维持DNA双螺旋结构。
在动植物、细菌和真菌中都含有DNA,但在病毒中不一定含DNA。
DNA为长丝状分子相互纠缠,其溶液十分黏稠。
它对紫外线有最强的吸收,通常用260nm波长测DNA溶液浓度,它在近中
性环境中带负电荷,DNA变性后OD值会升高。
因DNA不溶于乙醇,常用二倍量乙醇沉淀DNA。
在变性温度时,它的黏性突然降低。淬火是为了保持DNA单恋状态。
DNA变性后溶液慢慢冷却,DNA会自动回复双螺旋结构。
RNA是核糖核酸的英文缩写,在大多数生物类型中,RNA起遗传信息传递
作用并指导合成蛋白质,但在一部分病毒中,RNA也是遗传信息的保存者。
RNA分子中除了含有核糖而不是脱氧核糖外,凡DNA中出现胸腺嘧啶的地
方都代之以尿嘧啶。
二、DNA的复制和修复
细胞分裂一次,染色体DNA就合成一次。
DNA分子拆开成两条链,每一条单链按照碱基配对的原则合成另一条新的
单链,成为半保留复制。
在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。
1/13
DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上,才能顺
利开始DNA合成。
在DNA合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3?末端
的羟基上。
在合成大声错误时,DNA多聚酶会切除错误核苷酸,在那个位置上重新加
一个正确核苷酸。
在人工合成DNA时,至加一种或两种三磷酸单核苷酸,那么和成就会停止
在缺失的核苷酸位置上。
在大肠菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶是DNA聚合酶Ⅰ,而复制最
主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅱ。
该酶的核心聚合酶中,具有3?-5?外切酶活性。DNA修复过程中尿嘧啶糖基
酶系统不包括SⅠ核酸酶。
逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。
三、转录
在生物体内,DNA知道的RNA合成过程称为转录。
它是按照储存在DNA尚的遗传信息合成。
合成RNA时DNA双链也要解旋,解旋部位称启动子。
大肠菌的RNA聚合酶有5个亚基,其σ亚基有启动子作用。
四、翻译
再合成各种不同RNA中,tRNA具有搬运氨基酸功能。
构成核糖体骨架的是rRNA,而mRNA直接决定蛋白质的结构。
4种核苷酸排列组成遗传信息,很撑蛋白质时转换成20种氨基酸的排列顺
序,遗传信息的这种转换称为翻译。
2/13
3个核苷酸排列顺序代表一种氨基酸密码,表示蛋白质合成开始的密码有一
种,DNA3个终止密码子分别是UAA、UAG、UGA。
在细菌里,依靠rRNA和mRNA之间一段互补序列能发现蛋白质合成开始的
位置。
元和生物核糖体是由16SrRNA、23SrRNA和5SrRNA组成,在振和生物核糖
体的五种主要的组蛋白中,一种氨基酸的tRNA与其对应,这说明合成蛋白质结
束,并已开始同一种蛋白质分子的合成。
合成蛋白质后,决定其空间结构的是蛋白质的氨基酸排列顺序确定后,就
能自动折叠卷曲呈一定的空间形状。
第二节分子生物学基本技术
一、质粒DNA的分离、纯化和鉴定
质粒是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1~200kb不等,为双链、闭
环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能
力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表示所携带的遗传信息。
质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如致病的能力和对抗生素的抗性
等。
把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中进行繁殖
和表达的工具叫载体。
细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。
文档评论(0)