大豆编码zf--RVT结构域的五个非典型NLR基因的功能研究.pdf

内蒙古大学硕士学位论文

大豆编码zf—RVT结构域的五个非典型胞厅基因的功能研究

摘要

大豆(G咖切口肌锻(L．)Me圩．)是重要的油料作物，大豆花叶病毒

(劬6绷历D船记访馏，SMV)是一种在全球范围内广泛传播的病毒，严重影

响了大豆的品质和产量。由于大豆SMV菌株种类繁多，且目前鉴定到的抗性

基因(R＆ne)仅对一个或几个菌株起作用，因此挖掘大豆SMV抗性新基因

对大豆品种改良具有重要意义。在植物中，抗病性多数是由R基因编码的NLR

leuCiIle

(Nucleotide-biIldingrich即eats)蛋白所赋予。本实验室前期从大豆中

resis伽lcecluster

克隆到一个广谱抗性基因艘C7(SMV7)，包含TⅡ乙、NBS和

了关键作用。此外，SRC7属于具有整合结构域(IntI黜d

一个或多个结构域。M，R．Ds蛋白的发现标志着植物NLR生物学病理研究的

重大突破，它深刻地改变了我们对植物M瓜蛋白功能和进化的认知。

本研究从大豆中筛选到5个朋坎坷兔基因，根据其Ⅲ结构域z栅

inI奴，erse

(zinc-binding

resist趾ce

因依次编号并命名为豚Z(SMVgene

大豆编码zf：RVT结构域的五个非典型朋豫基因的功能研究

发现S趔D均在不同程度上抑制SI℃71N本身的抗病毒活性。通过酵母双杂交

以及双分子荧光互补实验发现4个SI泫Ⅲ蛋白均可与SI屺7TN产生相互作用。

为了进一步探究SI屹D的功能，将其与SMV的十个成分蛋白分别进行酵母双

杂交以及双分子荧光互补实验，共计验证40种互作组合，结果表明SRz3m蛋

白能与SⅢ的成分蛋白6比产生相互作用，且相互作用发生在细胞膜上。

为了进一步探究SRzm蛋白的分子功能，接下来本研究克隆了5个艘Z基

因全长。由于艘Z基因均较长，将其分为I段和II段，分别进行克隆后再通过

同源重组的方法连接到植物过表达载体中，但舣乃尚未克隆成功。之后对克

隆到的四个基因与SMV进行共侵染实验，验证其抗病毒活性，结果表明删

具有抗SMV病毒活性。随后本研究将SI屹4进行结构域截断，包括SI逻4讯、

SRz4NBs、

行抗性鉴定后发现SRz4的陬结构域在其抗病毒活性中起到关键作用，而其

D结构域尚未发现有明显功能。

为了深入研究艘尉的抗性机制，本研究对SRz4进行了大豆文库的筛选，

试图通过互作蛋白找到一些免疫通路相关信息。文库筛选到48个互作蛋白，

对其进行了GO数据分析以及结构域预测发现其主要富集在光合作用过程以及

删，G聊a酊C2，蚴，G聊孔，7。将其克隆后与艘泓分别进行一对一验

证，酵母双杂交实验结果显示6个候选基因与SI逻4存在相互作用。

现D在许多植物基因组中频繁出现。本研究旨在对大豆中编码正RVT结构域

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及其特异性，这有助于阐明植物免疫系统中许多新蛋白的功能，从而为今后大

豆花叶病害控制策略的新发展奠定基础。

关键词：大豆；NLR-ms；SⅢ；艘历；抗性基因；互作蛋白

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大豆编码zf：RvT结构域的五个非典型M豫基因的功能研究

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