编制说明-荧光定量聚合酶反应核酸检测系统.docx

一、任务来源

根据国家市场监督管理总局2022年国家计量技术规范制定、修订及宣贯计划（市监计量发〔2022〕70号）立项，由中国计量科学研究院、北京金域医学检验实验室有限公司和中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所共同承担《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系

统分析性能验证和确认技术规范》的制定工作。

二、规范修订的必要性

荧光定量PCR方法具有检测速度快、结果重复性高等优势，被广泛应用于核酸定量和定性的分析过程。荧光定量PCR方法广泛应用于食源微生物、食品过敏源、转基因食品、乳品等检测。与此同时，该方法已经在肿瘤诊断、病毒检测、动物疾病检测与筛查以及药物疗效的评价与考核等方面发挥重要作用，目前国内外的公司研制了多种

荧光定量PCR仪器[1]。

荧光定量PCR利用荧光标记物的荧光信号积累，实时监测PCR反应中每一个循环扩增产物的量，通过已知量值的工作标准物质建立标准曲线对核酸样品进行定量分析。针对RNA定量需要进行逆转录，将RNA逆转录为cDNA，再进行荧光定量PCR检测[2]。常用荧光标记物有TapMan探针、荧光染料等，TaqMan探针为标记有荧光基团和淬灭基团的一段寡核苷酸序列，能与目的DNA序列特异性结合。在PCR扩增过程中，荧光基团和淬灭基团分离，产生荧光信号。由于荧光定量PCR的定量结果依赖于标准曲线，标准曲线显著影响测

量结果的准确性[3,4]。

荧光定量PCR仪主要由样品载台、热循环部件、控制部件、光学经检测部件、电源部件、计算机及应用软件等部件组成[5]。荧光定量PCR仪在病原微生物检测等领域发挥重要作用。然而在不同实验室，荧光定量PCR分析性能的验证与确认方法有较大的差异，可能会影响测量结果的准确性与可比性[6]。制定《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系统分析性能验证和确认技术规范》，将为荧光定量PCR分析性能的控制提供参考，提升相关测量结果的有效性，帮助提高医疗

诊断科学性与食品安全性。

三、《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系统分析性能验证和确认技术

规范》制定过程

1.成立起草小组

2022年1-6月《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系统分析性能验证和确认技术规范》，组织成立规范起草小组，包括中国计量科学研究院、北京金域医学检验实验室有限公司、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、江苏硕世生物科技有限公司，项目正式启动。

2.规范起草

2022年7月-9月，起草小组对国内外相关的标准、文献和规范进行了调研，根据调研结果，起草了《荧光定量聚合酶链反应核酸检测

系统分析性能验证和确认技术规范》初稿。

2022年9月-12月，起草小组对规范草稿中的技术指标和要求进

行了专家仔细，通过咨询和讨论，进行完善修改。

2023年1月-2024年1月，针对确定的技术指标和要求开始实验

验证。并根据验证结果反复修改完善草稿。

3.征求意见

2023年2月，经过起草小组的充分讨论，形成了征求意见稿。开

始面向全国征求意见。

四、规范制定的主要技术依据及原则

（一）依据

本次制订中校准规范文本结构按照JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》的要求完成。其中不确定度评定部分按照JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》要求完成。主要性能指标参考了JJF1527-2015《聚合酶链式反应分析仪校准规范》、WS/T420《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》、WS/T492《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》、WS/T514《临床检验方法检出能力的确立和验证》、CNAS-GL037《临床化学定量检验程序性能验证指南》，以及CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》

中相关内容。

（二）原则

1、结构

结构按照引言、范围、引用文献、概述、性能验证和性能确认指标、工作条件、确认与验证时机、确认程序、验证程序、性能确认/

验证结果表达、性能确认/验证时间间隔、附录。

2、术语与计量单位的选择

术语和计量单位的选择遵照JJF1001-2011《通用计量术语及定义》

选择使用。

3、性能确认和验证指标的确定原则

根据荧光定量PCR仪的特点，确定检测系统分析性能验证和确认的主要技术指标，同时参考了JJF1527-2015《聚合酶链式反应分析仪校准规范》、WS/T420《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》、WS/T492《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》、WS/T514《临床检验方法检出能力的确立和验证》、CN